Kỹ thuật Điện Di và những điều cơ bản về Điện Di

5 (100%) 3 votes

Kỹ thuật Điện Di là gì?

Kỹ thuật điện di trên gel là kỹ thuật sử dụng để phân tích các nucleic: DNA, RNA và protein.

Các loại phân tử được phân tách với nhau dựa trên tốc độ di chuyển của chúng trên một loại môi trường bán rắn là gel.

Phụ thuộc vào loại nucleic mà sẽ có loại gel phù hợp.

Thông thường đối với DNA là Gel Agarose: xác định độ hiện diện cũng như kích thước của sản phẩm PCR; còn đối với RNA và protein, thường sử dụng Acrylamide do nó có độ phân giải cao hơn.

Sự di chuyển của các phân tử được tạo ra bởi từ trường, các phân tử có kích thước lớn sẽ di chuyển chậm hơn và ngược lại. DNA di chuyển từ cực âm (-) sang cực dương (+). Tốc độ di chuyển của DNA phụ thuộc vào: lực của điện trường, thành phần buffer, nồng độ gel, kích thước phân tử DNA.

Hai loại Buffer solution thường sử dụng trong kỹ thuật điện di: TBE và TAE.

  • TBE: Phân tách tốt các sản phẩm PCR có kích thước dưới 2kb, phù hợp để điện di phát hiện sản phẩm PCR cho các bệnh thông thường hoặc các gen mong muốn.

+ Ưu điểm: Thời gian dài không bị nóng gel.

+Nhược điểm: Muối borat sẽ làm ức chế hoạt động của enzyme, ví dụ như enzyme cắt nối… làm giảm tỷ lệ thu hồi DNA từ gel -> nếu sử dụng cho ứng dụng về sau thì không nên dùng.

  • TAE: Điện di những sản phẩm có kích thước lớn.

+ Ưu điểm: Buffer có thành phần muối acetate không ảnh hưởng, tác động đến những ứng dụng về sau -> có thể lấy sản phẩm PCR trong gel điện di để cloning tạo dòng.

+ Nhược điểm: Trong thời gian dài dễ xảy ra hiện tượng nóng gel -> ko nên kéo dài thời gian với điện thế lớn.

Nhuộm gel trong kỹ thuật điện di: Có nhiều loại hóa chất nhuộm gel như Ethidium bromide (EtBr), GelRed, GelGreen, SYBR…

  • Ethidium bromide: có 2 cách nhuộm gel là hòa vào gel trước khi đổ (khi gel không còn nóng) hoặc sau khi điện di, nhuộm bằng cách ngâm gel vào dung dịch có chứa EtBr.
  • GelRed: không có khả năng xâm nhập tế bào -> không gây hại, bền với nhiệt độ, nhạy hơn, phù hợp với tất cả các thiết bị, không gây độc cho các loại vi khuẩn -> có thể sử dụng cho các ứng dụng sau đó…

Để được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc, hướng dẫn sử dụng và báo giá cụ thể, hãy liên hệ ngay với Visitech – Công ty TNHH Khoa học Kỹ thuật Việt Sinh qua các thông tin bên dưới:

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *