Kit qPCR phát hiện virus gây bệnh dịch tả heo cổ điện CSFV Visikit ANIMR- 07

Mô tả
Đánh giá (0)

CSFV gây ra bệnh gì?

Dịch tả heo (Classical Swine Fever– CSF) là một trong những bệnh truyền nhiễm mạnh nhất do vi-rút (pestivirus) và gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành công nghiệp chăn nuôi heo (Van Oirschot, 1999, được xếp vào danh sách những bệnh đỏ – List A).

Virus gây bệnh là một thành viên của giống Pestivirus thuộc họ Flaviviridae, có liên quan gần đến virus gây bệnh tiêu chảy ở bò (bovine viral diarrhoea) và virus gây bệnh Biên giới (Border disease). Ở đây chỉ có một chủng huyết thanh (serotype) của virus CSF (CSFV).

Những triệu chứng lâm sàng khi bị nhiễm CSFV

Heo bệnh ở thể cấp tính thường có những dấu hiệu như: Sốt cao (41- 42oC), bỏ ăn, nằm nghiêng, tăng tần số hô hấp, nôn và chảy nước mắt, nước mũi. Heo xuất hiện những đám hoặc nốt xuất huyết ở tai, bụng, bẹn, đuôi và chân. Heo có hiện tượng táo bón rồi tiêu chảy, phân có thể nhày hoặc lẫn máu (có thể quan sát thấy dính vào gốc đuôi). Về bệnh tích khi mổ khám có thể thấy hiện tượng xuất huyết dưới da, sưng và xuất huyết ở hạch lâm ba khiến hạch lâm ba đỏ tím như cục máu (đặc biệt là hạch ở vùng gần dạ dày, gan và thận). Xoang bao tim tích nước vàng, tràn dịch màng phổi, tích dịch ở xoang bụng. Phổi sung huyết hoặc xuất huyết thành đốm, khí phế quản tích bọt. Vỏ thận xuất huyết điểm. Dạ dày và ruột cũng xuất huyết thành đốm hoặc thành mảng.

Phương thưc lây truyền bệnh do CSFV

Sự lây truyền của virus gây bệnh DTHCP rất phức tạp, bao gồm nhiều yếu tố, tuy nhiên con đường chính truyền bệnh được biết qua: Việc con người đi lại từ những nơi có mối nguy tiềm tàng gây bệnh và con người vận chuyển thực phẩm nhiễm bệnh từ khu vực bị bệnh, đối với khoảng cách xa, và trực tiếp tiếp xúc giữa heo rừng mang bệnh hoặc heo nuôi mang bệnh với khoảng cách gần.

Những yếu tố lây bệnh khác như những con bọ trong vùng cận nhiệt đới, nguồn nước nhiễm bẩn, thực phẩm và xe vận chuyển thức ăn bị nhiễm bẩn, và những đường lây truyền tương tự như các loại virus khác.

Phương pháp phát hiện CSFV

Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi rút gây bệnh trên thú y như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, quan sát máu dưới kính hiển vi, kit test nhanh [*],… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại kết quả có độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất cần kết quả thử nghiệm có độ tin cậy, chính xác cao.

Vì vậy, việc sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của tổ hợp nhiều loại vi rút gây bệnh trên thú y chỉ thông qua một thí nghiệm sẽ giúp cải thiện được thời gian, độ nhạy và độ đặc hiệu cao.

CSFV RT qPCR Visikit

Sản phẩm CSFV RT qPCR Visikit được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện vi rút gây bệnh. Đối với phương pháp real- time PCR sử dụng bộ kit CSFV RT qPCR Visikit yêu cầu phải trang bị một số thiết bị phục vụ cho việc phát hiện mầm bệnh như máy real- time PCR, máy ly tâm, tủ bảo quản và một số vật tư tiêu hao thông thường,…cùng đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo về chuyên môn cũng như kỹ năng.

Visitech sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất. Chúng tôi sẽ lựa chọn cho bạn một giải pháp tốt nhất phù hợp với yêu cầu của bạn.

Điều kiện lưu trữ

-20⁰C

Tên sản phẩm

CSFV RT qPCR Visikit

Mã sản phẩm

ANIMR- 07

Nhà sản xuất

Visitech- Việt Nam

Hạn sử dụng

12 tháng kể từ ngày sản xuất

Thành phần bộ kit

Thành phần	Quy cách
Thành phần	50 test
CSFV RT qPCR mix	64×20µL
Chứng dương CSFV	1×100 µL
Chứng âm	1x1mL

Hướng dẫn sử dụng

Chuẩn bị mẫu

✓ Mẫu máu/ huyết thanh: Lấy 5- 10 mL máu, để tách huyết thanh trộn đều rồi ly tâm 8000 g trong 1 phút sau đó bảo quản lạnh để đem đi tách RNA.

✓ Mẫu swab dịch miệng: Dùng gạc hoặc tăm bông vô trùng ngoáy lấy dịch miệng đựng trong ống vô trùng, bổ sung 3- 5 mL dung dịch bảo quản PBS, bảo quản lạnh để tách chiết RNA.

✓ Mẫu mô, phổi, hạch: dùng panh, kéo lấy 1- 2 g, cắt nhỏ rồi nghiền nát trong dung dịch PBS pH = 7,2. Ly tâm lấy dịch nổi và xử lí với kháng sinh Penicillin (200UI/mL) và Streptomycin (200UI/mL).

✓ Mẫu môi trường:

o Khu vực lấy mẫu: Nền, chuồng trại, máng thức ăn, dụng cụ thiết bị chăn nuôi

o Lấy mẫu: Dùng tăm bông vô trùng chà xát bề mặt môi trường xung quanh theo chiều zizac, sau đó cho tăm bông cho vào tube chứa sẵn 500 μL dung dịch đệm.

Lưu ý:

o Mẫu sau khi lấy nên vận chuyển trong điều kiện lạnh 4-8 oC và bảo quản ở tủ đông cho đến khi tiến hành xét nghiệm.

Tách chiết RNA

✓ Bộ Genomic DNA/RNA Extraction Visikit được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết RNA virus từ mẫu mô, bộ Fluid Viral Extraction Visikit cho tách mẫu swab dịch hầu họng và mẫu môi trường; và bộ kit Serum Viral Extraction Visikit được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết RNA virus từ mẫu huyết thanh. Qui trình thực hiện xem theo HDSD của các bộ kit kể trên.

Thực hiện phản ứng Realtime RT- PCR:

✓ Lấy đúng số lượng ống CSFV rRT- PCR Mix cần thiết, rã đông bằng cách để ở nhiệt độ phòng, sau đó spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.

✓ Hút 5 μL RNA mẫu, chứng âm tách chiết, chứng dương cho vào các tube CSFV rRT- PCR mix đã chuẩn bị ở trên.

Chú ý:

– Mỗi lần chạy nên có ít nhất 1 chứng âm tách chiết, 1 chứng dương và 1 chứng âm PCR.

– Chuẩn bị phản ứng theo thứ tự sau: Chứng âm, chứng âm tách chiết, mẫu và chứng dương.

✓ Đóng nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho

CSFV và kênh màu HEX cho chứng nội.Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:

1 chu kỳ:	45^oC	15 phút
1 chu kỳ:	95^oC	3 phút
45 chu kỳ:	95^oC	10 giây
45 chu kỳ:	60^oC	30 giây (chọn đọc tín hiệu ở bước này)

Phân tích kết quả

✓ Mẫu âm tính với CSFV: chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu

✓ Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng real-time RT-PCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại RNA.

✓ Mẫu dương tính với CSFV: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.

Bảng tóm tắt phân tích kết quả:

STT	CSFV (FAM)	IC (HEX)	Kết luận
1	–	+	Mẫu âm tính CSFV
2	+	+/-	Dương tính CSFV
3	–	–	Không thể kết luận

Xử lý sự cố

Đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của Visitech chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục:

Sự cố	Nguyên nhân	Khắc phục
Không xuất hiện tín hiệu nào ở tất cả các giếng, kể cả chứng dương	Cài đặt sai chương trình qPCR Khai báo vị trí và thông số giếng sai Thiết bị qPCR gặp sự cố Hóa chất của kit không được bảo quản theo đúng chỉ định	Kiểm tra lại chương trình chạy qPCR Kiểm tra lại thông tin các giếng Kiểm tra lại hoạt động của thiết bị qPCR Kiểm tra lại điều kiện bảo quản và hạn sử dụng của kit
Chứng dương bình thường mẫu xét nghiệm không cho tín hiệu vượt ngưỡng nào, kể cả màu HEX	Hàm lượng DNA thu được quá cao Có chất ức chế trong mẫu	Pha loãng 10 lần dịch DNA và thực hiện lại phản ứng PCR Bổ sung một lượng nhỏ chứng dương mục tiêu vào mẫu tách chiết. Nếu kết quả vẫn âm tính thì kết luận có chất ức chế trong mẫu. Tiến hành tách chiết lại hoặc xử lý như cách 1
Tín hiệu FAM, HEX vượt ngưỡng trong chứng âm, chứng âm tách chiết	Micropipet bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR Hóa chất PCR bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR Môi trường làm việc bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR	Vệ sinh hoặc thay micropipet mới; sử dụng filter tip Sử dụng hóa chất PCR khác Yêu cầu bộ phận kỹ thuật đến vệ sinh môi trường làm việc.

Visitech – Nhà sản xuất Kit PCR chất lượng cao

Ngoài việc phát hiện CSFV trên gia súc, Visitech chúng tôi còn cung cấp thêm các kit qPCR phát hiện các loài virus, vi khuẩn gây bệnh trên thú y theo link danh mục sau:

https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/kit-test/kit-pcr/

Khi truy cập vào link này, chúng ta sẽ thấy thêm rất nhiều loại Kit cũng thường xuyên được sử dụng. Ví dụ như: Kit qPCR JEV [*] để phát hiện bệnh trong nhóm thú y. Hay Kit ASFV gây bệnh trên heo [*] hay Kit qPCR PED [*] để phát hiện PED gây bệnh trên heo và còn rất nhiều Kit khác…

Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện bệnh, Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Mời Qúy khách hàng tham khảo Link bên dưới: https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/sinh-hoc-phan-tu/

Tại sao nên chọn Visikit

Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử là một trong những thế mạnh của chúng tôi.

Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485 năm 2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý an toàn cho sản phẩm.

Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R & D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng.

Đặc biệt, công ty chúng tôi có hàng DEMO để chạy thử nghiệm nhằm chứng minh chất lượng đối với những khách hàng có nhu cầu. Kỹ sư chúng tôi sẽ trực tiếp hướng dẫn và training cho tới khi thành thạo.

Thông tin liên hệ Visitech

Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit PCR phát hiện CSFV của Visitech mà chúng tôi biên soạn. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích.

Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới: