E.coli PCR Visikit FFP-06

Đặc điểm của vi khuẩn E. coli 

E.coli là những trực khuẩn gram (-) thuộc nhóm Escherichia, không sinh nha bào, có thể di động hoặc không di động.

E.coli ký sinh bình thường ở ruột người và đặc biệt ở ruột già, ngoài ra còn ở niêm mạc miệng, sinh dục và cả ở ngoài môi. E.coli phát triển ở nhiệt độ: 5°C đến 40°C và tốt nhất ở 37°C, pH thích hợp là 7-7,2. Như các loại ko sinh nha bào khác E.coli không chịu được nhiệt độ, đun 55°C/1 giờ hoặc 60°C/30 phút và bị tiêu diệt.

Hình dạng: Vi khuẩn thuộc loại trực khuẩn gram âm, di động bằng tiêm mao quanh tế bào, không tạo bào tử, loại có độc lực thì có capsul, loại không có độc lực không có capsul. Kích th ước trung bình (0,5µ x 1-3µ) hai đầu tròn. Một số dòng có lông bám (pili).

Cơ chế gây bệnh 

Nhóm E.coli gây xuất huyết đường ruột

Tác nhân gây bệnh chủ yếu là E.coli týp huyết thanh 0157:H7. Bệnh ỉa chảy có thể diễn biến từ nhẹ, phân không có máu đến thể phân toàn máu nhưng không chứa bạch cầu. Các chủng này có thể gây ra hội chứng tan máu, tăng urê huyết và các ban đỏ do thiếu tiểu cầu gây ra.

Cách lây bệnh: bệnh truyền do ăn phải thức ăn nhiễm khuẩn, thường là do thịt bò chưa nấu kỹ (đặc biệt thịt bò xay) và sữa tươi. Bệnh có thể truyền từ người sang người hoặc truyền qua nước.

Nhóm E.coli gây bệnh

Chủng E.coli này không sản xuất độc tố ruột dù chúng gây ỉa chảy. Chủng E.coli này gắn chặt tại chỗ với các tế bào ở các mô, rồi chúng tự động tập trung lại ở các mô niêm mạc ruột. Tại đó chúng phá hủy các vi nhung mao ruột hoặc tồn tại kéo dài hơn tại các vị trí gắn kết và gây ra ỉa chảy. Nói chung nhóm này hay gây ra ỉa chảy ở trẻ em<1 tuổi. Ỉa chảy ở trẻ em có thể nặng và kéo dài, có thể tử vong cao.

Cách lây bênh: Bệnh truyền qua đường thức ăn và sữa của trẻ bị nhiễm khuẩn. Trong nhà trẻ, bệnh lây truyền qua đồ vật và tay bị nhiễm khuẩn khi kỹ thuật rửa tay không đảm bảo.

Nhóm E.coli sinh độc tố ruột

Nhóm này xâm nhập vào ruột và sinh ra 1 hoặc 2 loại độc tố ruột. Những độc tố ruột này gây ỉa chảy nặng, không có máu, chất nhày giống tả ở trẻ em và người lớn. Nhóm này ít gây sốt và đột ngột ỉa chảy. Nhóm E.coli này là 1 trong những nguyên nhân chủ yếu gây ỉa chảy ở những người đi du lịch đến các vùng lạ.

Tác nhân gây bệnh: gồm các chủng sinh ra các độc tố không chịu nhiệt, độc tố chịu nhiệt độ hoặc cả hai loại độc tố. Độc tố không chịu nhiệt bị phá hủy ở 60°C/30’, trong khi độc tố chịu nhiệt có thể tồn tại khi đun 100°C/15’.

Cách lây bệnh: lây qua thực phẩm, nước bị nhiễm khuẩn và qua thức ăn của trẻ em.

Nhóm E.coli xâm nhập

Nhóm này không sinh độc tố ruột như nhóm sinh độc tố ruột. Nhưng chúng xâm nhập và nhân lên ở các tế bào biểu mô ruột, rồi chúng lan sang các tế bào bên cạnh theo cách giống ngộ độc do lỵ trực khuẩn và gây ra ỉa chảy nặng có thể không có máu hoặc có máu giống lỵ, viêm ruột tan huyết, có thể dẫn đến tử vong.

Nhóm này hay gây bệnh ở trẻ em và người già.

Triệu chứng trúng độc 

Thời kỳ ủ bệnh 2-20 giờ. Người ngộ độc thấy đau bụng dữ dội, đi phân lỏng nhiều lần trong ngày, ít khi nôn mửa. Thân nhiệt có thể hơi sốt. Trường hợp nặng bệnh nhân có thể sốt cao, người mỏi mệt, chân tay co quắp đổ mồ hôi. Thời gian khỏi bệnh vài ngày. Nguyên nhân là do nhiễm E.coli vào cơ thể với số lượng lớn và cơ thể đang suy yếu.

Biện pháp phòng ngừa ngộ độc E.coli 

E.coli gây tiêu chảy thường theo phân ra ngoài do đó dễ gây thành dịch. Do đó cần phải nấu chín kỹ thức ăn và kiểm tra nghiêm ngặt quy trình chế biến thực phẩm.

Vai trò kiểm tra nhanh vi khuẩn E.coli 

Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi khuẩn E.coli như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, Petrifilm 3M… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại các kết quả có độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất lớn với các yêu cầu nghiêm ngặt về chất lượng sản phẩm.

E.coli PCR ViSiKit

Để có thể giải quyết các vấn đề trên chúng ta có thể sử dụng phương pháp PCR để kiểm tra sự hiện diện của vi khuẩn E.coli trên mẫu thực phẩm. Sản phẩm E.coli PCR ViSiKit  được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện E.coli. Bên cạnh các ưu điểm của phương pháp PCR sử dụng bộ kit E.coli PCR ViSiKit cũng đòi hỏi các trung tâm xét nghiệm cần trang bị các phòng thử nghiệm đạt độ an toàn và các thiết bị như máy PCR, máy ly tâm, tủ âm sâu… cùng đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo chuyên nghiệp. Visitech chúng tôi sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất.

Điều kiện lưu trữ

 -20⁰C

Tên sản phẩm

E.coli  PCR ViSiKit 

Mã sản phẩm

FFP-06

Nhà sản xuất

Visitech- Việt Nam

Hạn sử dụng

12 tháng kể từ ngày sản xuất

Thành phần bộ kit

Hướng dẫn sử dụng

Quy trình tách chiết DNA 

Quy trình tách thủ công: Được áp dụng cho các phòng kiểm nghiệm nhỏ và số lượng mẫu tương đối ít. Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,…hoặc để tiện lợi hơn Visitech giới thiệu các bạn tham khảo bộ Kit tách chiết bằng phương pháp cột Silica của chúng tôi: Food DNA Extraction ViSiKit (**) hoặc bộ Tissue Viral Extraction kit (**)

Quy trình tách tự động: Được áp dụng phù hợp cho các phòng kiểm nghiệm độc lập, công ty thực phẩm, doanh nghiệp sản xuất có số lượng mẫu lớn, đòi hỏi thời gian kiểm nghiệm nhanh. 

Visitech hiện đang cung cấp các loại hóa chất tự động trên đa dạng nhiều loại máy khác nhau như máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) (**) của hãng Bioer, máy tách chiết tự động của hãng Thermo Kingfisher, máy tách chiết tự động của hãng TANbead… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao dành riêng cho từng máy,.. Từ đó chúng tôi sẽ chọn Kit phù hợp cho nhu cầu của từng đơn vị. Ví dụ đối với máy NPA-32 của hãng  Bioer chúng tôi có Kit tách chiết: Maga Genomic DNA/RNA Extraction VISIKIT (MGEKA-32.R.B) (**)

Để biết thêm chi tiết cho các thiết bị liên quan đến tách chiết DNA/RNA tự động các bạn có thể liên hệ Visitech qua số hotline hoặc email (**)

Thực hiện phản ứng PCR

Lấy số lượng cần thiết ống FFP-06 PCR mix. Rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15–25°C), sau đó spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.

Hút 5 μL DNA mẫu, chứng âm tách chiết, chứng dương cho vào các tube E.coli PCR mix đã chuẩn bị ở trên.

• Chú ý:

Mỗi lần chạy nên có ít nhất 1 chứng âm tách chiết, 1 chứng dương và 1 chứng âm PCR.

Chuẩn bị phản ứng theo thứ tự sau: Chứng âm, chứng âm tách chiết, mẫu và chứng dương.

 Đóng nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy.

• Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:

Điện di

Bộ kit điện di Agarose Electrophoresis (AE-01) được khuyến cáo sử dụng cho điện di sản phẩm PCR. Qui trình thực hiện xem hướng dẫn của bộ Agarose Electrophoresis (AE-01).(**)

Phân tích kết quả

• Sau khi điện di hoàn tất, kết quả điện di được đọc trên bàn đèn UV hoặc máy đọc gel sử dụng đèn UV
• Thang DNA 100bp sử dụng gồm 10 vạch từ 100 đến 1000 bp
• Kết quả dự kiến như sau:

+ Mẫu dương tính với E.coli: hiện băng với kích thước 497 bp (ngang vạch 500bp của Thang 100 bp)

+ Chứng nội: hiện băng với kích thước 102 bp

Chú ý: Một số trường hợp xuất hiện vạch mờ phía dưới vạch 100 bp là do mồi thừa sau phản ứng.

Trong chứng dương đã bao gồm sẵn DNA chứng nội và E.coli

Xử lý sự cố

Tại sao nên chọn Visikit

Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử là một trong những thế mạnh của chúng tôi. 

Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485 năm 2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý an toàn cho sản phẩm.

Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R & D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng. 

Đặc biệt, công ty chúng tôi có hàng DEMO để chạy thử nghiệm nhằm chứng minh chất lượng đối với những khách hàng có nhu cầu. Kỹ sư chúng tôi sẽ trực tiếp hướng dẫn và training cho tới khi thành thạo.

Visitech – Nhà sản xuất Kit PCR chất lượng cao

Ngoài việc phát hiện E.coli trong thực phẩm, Visitech chúng tôi còn cung cấp thêm các kit PCR phát hiện các loài vi sinh gây bệnh thực phẩm khác theo link danh mục sau: 

https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/kit-test/kit-pcr/

Khi truy cập vào link này, chúng ta sẽ thấy thêm 4 loại Kit cũng thường xuyên được sử dụng. Ví dụ như: Kit PCR Salmonella (**) để phát hiện Salmonella spp. trong thực phẩm hay Kit PCR Listeria (**) để định tính Listeria spp. ; Kit PCR Staphylococcus aureus (**) để phát hiện Staphylococcus aureus trong thực phẩm…

Bên cạnh đó, Visitech chúng tôi cũng đã có danh mục sản phẩm Kit Realtime PCR phát hiện các loài vi sinh thực phẩm gây bệnh tương tự Kit PCR. Tuy nhiên, Realtime PCR là kỹ thuật được cải tiến từ PCR. Nó khắc phục được những khuyết điểm mà PCR chưa làm được.

Thông tin chi tiết xin truy cập Link:  

https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/kit-test/kit-real-time-pcr/  

Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện bệnh, Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Mời Qúy khách hàng tham khảo Link bên dưới: https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/sinh-hoc-phan-tu/ 

Thông tin liên hệ Visitech 

Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit PCR phát hiện E. coli của Visitech mà chúng tôi biên soạn. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích. 

Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới:

• Email: info@visitech.vn
• Hotline: 0919112141
• Zalo: 0919112141
• Website: https://visitech.vn/
• Map: Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh 
• Kênh Youtube: Visitech
• Fanpage: Visitech