Giới thiệu
Bộ Plasmid DNA Extraction ViSiKit là công cụ lý tưởng để tách chiết và tinh sạch DNA plasmid từ vi khuẩn bằng phương pháp cột silica. Phương pháp ly trích dựa trên công nghệ màng cột silica với buffer ly giải tối ưu tạo nên 1 quy trình đơn giản, nhanh chóng, sản phẩm tách chiết có độ tinh sạch cao.
Quy trình tách chiết và tất cả các buffer đều được tối ưu hoá để đảm bảo hiệu suất cao cũng như độ tinh khiết của DNA. Sản phẩm sau khi tách chiết được tạo ra để sử dụng cho các ứng dụng tiếp theo như: Real-time PCR, giải trình tự, Southern blot, SNP.
Giới hạn sử dụng sản phẩm
- Những hóa chất đi kèm chỉ được sử dụng một lần.
- Sản phẩm có thể không có tác dụng với những vật liệu mẫu khác, do đó sản phẩm không được bảo hành trong trường hợp này.
Thông tin an toàn
- Khi làm việc với hóa chất, luôn mang áo choàng, găng tay dùng một lần và nên đổi găng tay sau mỗi bước để hạn chế nhiễm chéo.
- Tránh tiếp xúc với da
Bộ Plasmid DNA Extraction ViSiKit cung cấp một giải pháp nhanh chóng và hiệu quả để tách chiết đồng thời DNA/RNA chất lượng cao cho nguồn mẫu vi khuẩn. Số lượng DNA/RNA tinh sạch được từ bộ Plasmid DNA Extraction ViSiKit phụ thuộc vào loại mẫu, vị trí lấy mẫu, hàm lượng virus có trong mẫu, nguồn mẫu, quá trình vận chuyển/ bảo quản mẫu và tuổi của bệnh phẩm.
Hướng dẫn sử dụng
Thành phần và quy cách sản phẩm
| Thành phần | Quy cách | Công dụng | |
| 50 test
PLEKA-01 |
100 test
PLEKA-02 |
||
| PS buffer | 15 mL | 2 x 15 mL |
|
| PL buffer | 15 mL | 2 x 15 mL | |
| PP buffer | 25 mL | 2 x 25 mL | |
| WB1 buffer(*) | 18 mL | 2 x 18 mL |
|
| WB2 buffer (*) | 9 mL | 2 x 9 mL | |
| RNase A (1mg/mL) | 1.5 mL | 2 x 1.5 mL |
|
| EB buffer | 20 mL | 2 x 20 mL |
|
| Ethanol | 50 mL | 2 x 50 mL |
|
| Cột silica | 50 cái | 2 x 50 cái |
|
| Tube 1.5 mL |
100 cái | 2 x 100 cái |
|
Hạn sử dụng
12 tháng kể từ ngày sản xuất.
Lưu ý trước khi sử dụng
- (*) Thêm ethanol vào WB1 buffer, WB2 buffer vào lần đầu tiên sử dụng theo hướng dẫn trên nhãn chai.
Các thiết bị cần cho quá trình ly trích
- Micropippet
- Máy ly tâm
- Máy vortex
- Côn/ Tip
Quy trình thực hiện
Những điểm quan trọng trước khi bắt đầu quy trình
- Kiểm tra thành phần cũng như đóng gói của sản phẩm đảm bảo không có bất kỳ hư hỏng bề ngoài, đủ số lượng và chất lượng.
- Hãy thông báo cho chúng tôi ngay lập tức nếu có kỳ vấn đề xảy ra sau khi kiểm tra lô hàng.
- Không sử dụng các thành phần đã hư hỏng, nếu không sẽ dẫn đến giảm hiệu quả của bộ thuốc thử.
- Luôn thay đầu côn/ tip giữa các lần hút. Nên sử dụng đầu côn/ tip có lọc để tránh nhiễm chéo.
- Tất cả các bước ly tâm được thực hiện ở nhiệt độ phòng.
- Khi thao tác với hóa chất, phải mang đồ bảo hộ, găng tay và kính bảo vệ.
- Bỏ găng ngay nếu bị nhiễm.
- Không nên hòa các thành phân của bộ thuốc thử với nhau nếu không cùng lô sản phẩm
- Tránh để các thuốc thử bị nhiễm.
- Thao tác các mẫu dưới điều kiện thông khí phòng thí nghiệm cho đến khi mẫu được ly giải hoàn toàn để tránh nguy cơ nhiễm.
- Chỉ những nhân viên được đào tạo về SHPT mới được sử dụng bộ thuốc thử.
Quy trình thực hiện chi tiết
Thu mẫu
- Vi khuẩn nên được nuôi cấy từ 12 đến 16 giờ trong môi trường lỏng và đạt OD600 từ 1.5 – 5.0
- Ly tâm 0.5 – 4 mL dịch nuôi cấy vi khuẩn ở tốc độ 13,000 rpm trong 2 phút.
- Loại bỏ dịch nuôi cấy
Tách chiết plasmid
- Thêm 225 μL PS Buffer và 25 μL RNase A vào tube chứa cặn vi khuẩn. Hòa tan vi khuẩn và trộn đều.
- Cho thêm 250 μL PL Buffer. Trộn đều bằng cách đảo 3 – 6 lần (không vortex). Ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút (không ủ quá 5 phút).
- Thêm 350 μL PP Buffer (đã làm lạnh), trộn đều bằng cách đảo 3 – 6 lần. Ủ trên đá lạnh trong 5 phút. Ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 10 phút.
- Sau khi ly tâm, chuyển dịch nổi qua cột silica và ly tâm ở tốc độ 13.000 rpm trong 1 phút.
- Giữ lại cột và loại bỏ phần chất lỏng bên dưới. Thêm 500 μL WB1 Buffer và ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút.
- Giữ lại cột và loại bỏ phần chất lỏng bên dưới. Thêm 500 μL WB2 Buffer và ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút.
- Giữ lại cột và loại bỏ phần chất lỏng bên dưới. Làm khô cột bằng cách ly tâm 13,000 rpm trong 1 phút.
- Chuyển cột sang tube 1.5 mL mới. Thêm 100 μL EB buffer. Ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút, thu phần dịch chứa DNA plasmid bên dưới.
- DNA được sử dụng ngay hoặc bảo quản ở -200C.
Những vấn đề gặp phải khi tách chiết ADN hoặc ARN bằng kit và cách khắc phục
Hiệu suất tách chiết thấp: có thể do các nguyên nhân sau:
- Do giai đoạn ly giải: mẫu chưa được ly giải hoàn toàn
- Điều kiện cho quá trình gắn không đúng, chất lượng ethanol không đảm bảo, nồng độ thấp ảnh hưởng hiệu quả gắn.
- Nếu đệm rửa không chính xác cũng giảm hiệu quả gắn ADN hoặc ARN vào cột dẫn tới hiệu suất tách chiết thấp.
Độ tinh sạch thấp:
- ADN tách chiết bị nhiễm protein (tỷ lệ 260/280 thấp) có thể do lượng mẫu sử dụng quá nhiều và protein không được ly giải và không được loại bỏ hoàn toàn.
- ADN có tỉ lệ 260/230 thấp có thể do muối từ quá trình gắn hoặc đệm rửa vẫn còn sót lại chưa được loại bỏ hoàn toàn, vấn đề này sẽ ảnh hưởng rất lớn đến các quy trình tiếp theo như PCR.
Đứt gãy DNA/ RNA
ADN bị đứt gãy quá nhiều, có thể là do bạn đã sử dụng bước ly giải quá mạnh.
Tắc màng Silica
- Quá trình ly giải và đồng nhất không đủ và/hoặc quá nhiều vật liệu mẫu ban đầu, bạn nên tăng thời gian ly giải, tăng lực ly tâm /hoặc thời gian ly tâm, giảm lượng mẫu ban đầu.
Lưu trữ DNA/ RNA
DNA/RNA virus sau khi tách chiết sẵn sàng để sử dụng hoặc có thể được lưu trữ ở -80°C để sử dụng cho cho nhiều ứng dụng tiếp theo như:
- PCR & Real-time PCR
- Tổng hợp cDNA
- Ứng dụng mircoarray
Với quy trình thực hiện nhanh, đa phần chỉ đơn giản là các bước li tâm ngắn, bộ tách chiết mang lại hiệu suất thu DNA/ RNA cao, sẵn sàng phục vụ cho các bước nghiên cứu tiếp theo. Tuy nhiên, bộ KIT này chúng tôi sản xuất chuyên cho xét nghiệm các mẫu vi khuẩn. Nếu nhu cầu của bạn kiểm nghiệm trên nhiều tác nhân khác nhau. Visitech giới thiệu bạn bộ tách chiết bằng phương pháp thô Crude DNA Extraction ViSiKit (**), Bộ kit này có thể sử dụng trên đa dạng các loại mẫu khác nhau, đòi hỏi trang bị thêm các thiết bị phụ trợ như máy li tâm tốc độ cao (**) và máy ủ nhiệt (**) để phục vụ cho quá trình tách chiết được tốt nhất.
Visitech – Nhà sản xuất Kit tách chiết chất lượng cao
Ngoài bộ tách chiết Plasmid DNA Extraction Visikt thì chúng tôi còn có thêm các bộ tách chiết cột cho các loại mẫu khác như mẫu thực phẩm, mẫu vi khuẩn, mẫu máu… Tuy nhiên phương pháp này sẽ phù hợp với các đơn vị có số lượng mẫu nhỏ, đối với một số nhà máy, trung tâm kiểm nghiệm lớn thì cần trang bị thêm hệ thống tách chiết tự động (**) để đảm bảo công suất hoạt động cho đơn vị.
Ngoài việc cung cấp hóa chất tách chiết, Visitech cũng cung cấp kèm theo các hóa chất phát hiện bệnh bằng phương pháp PCR- Realtime PCR đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể cho việc phát hiện bệnh trên nhiều đối tượng khác nhau.
Đặc biệt, Visitech cũng cung cấp đầy đủ các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Mời Qúy khách hàng tham khảo Link bên dưới: https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/sinh-hoc-phan-tu/
Tại sao nên chọn Visikit
Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử là một trong những thế mạnh của chúng tôi. Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng nhất theo tiêu chuẩn ISO 13485:2016. Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R&D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng.
Đặc biệt, công ty chúng tôi luôn sẵn sàng để hỗ trợ quý đối tác thử nghiệm sản phẩm trước khi kí hợp đồng nhằm chứng minh chất lượng đối với những khách hàng có nhu cầu. Kỹ sư chúng tôi sẽ trực tiếp hướng dẫn bạn thử nghiệm cho tới khi thành thạo đạt yêu cầu.
Thông tin liên hệ Visitech
Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit tách chiết bằng phương pháp cột Silica Plasmid DNA Extraction ViSiKit (**) của của Visitech mà chúng tôi biên soạn. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích.
Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới:
- Email: info@visitech.vn
- Hotline: 0919112141
- Zalo: 0919112141
- Website: https://visitech.vn/
- Map: Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh
- Kênh Youtube: Visitech
- Fanpage: Visitech
- Địa chỉ: 730/1/2/7C Hương Lộ 2, Phường Bình Trị Đông A, Quận Bình Tân, Tp.HCM
Đánh giá
Chưa có đánh giá nào.