Trong mỗi quy trình thực hiện Real-time PCR đều có những nguyên liệu giống và khác nhau, vậy nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm bao gồm những gì? Các bạn tham khảo qua bài viết này nhé.
Xem thêm bài viết
Tiêu chuẩn cơ sở của Cục Thú y – Real-time PCR phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) ở tôm
Nguyên tắc:
Virus gây hội chứng đốm trắng ở tôm được phát hiện bằng kỹ thuật Real-time PCR với primer xuôi WSSV1011F, primer ngược WSSV1029R và đoạn dò Taqman Probe WSSV-p.
Những nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV:
-
Nguyên liệu sinh học:
- Đoạn primers và đoạn dò (probe) cho virus WSSV: WSSV1011F, WSSV1079R, WSSV-p.
- Đoạn primer và đoạn dò (probe) cho quá trình kiểm soát tách chiết: 18S Forward; 18S Reverse; 18S Probe.
- Hệ thống đối chứng cần có trong quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm:
+ Đối chứng âm: thường là mẫu nước tinh khiết không có DNA/RNA.
+ Đối chứng dương: mẫu có chứa DNA của virus WSSV được tách chiết từ mẫu dương chuẩn.
- Hệ thống đối chứng kiểm soát quá trình tách DNA:
+ Đối chứng âm là PBS dùng xử lý mẫu hoặc mẫu mô tôm không mang virus WSSV.
+ Mẫu đối chứng dương là mẫu có chứa DNA vật chủ hoặc tế bào động vật.
-
Nguyên liệu hóa học:
- Dung dịch Phosphate Buffered Saline (PBS)
| Thành phần | Số lượng (gram) |
| NaCl | 8.0 |
| KCl | 0.2 |
| Na2HPO4 | 1.15 |
| KH2PO4 | 0.2 |
Lượng hóa chất trên được cho vào bình thủy tinh, cho nước cất vào vừa đủ 1 ít, hòa tan hoàn toàn, pH 7.2 và đem hấp vô trùng 121oC trong 15 phút.
- Cồn 90% và 70%.
- Kit tách chiết DNA/RNA.
- Master Mix hoặc kit tương đương.
-
Thiết bị, dụng cụ cần có:
- Máy Vortex (trộn mẫu).
- Nồi hấy khử trùng Autoclave.
- Máy ly tâm nhỏ (Centrifuge spin).
- Máy lắc và ủ nhiệt (nhiệt độ từ 37 – 100oC).
- Tủ an toàn sinh học cấp 2
- Máy tách chiết RNA/DNA tự động.
- Máy ly tâm lạnh cho eppendorf 1.5ml.
- Tủ lạnh lưu trữ ở các nhiệt độ: 4oC, -20oC, -80o
- Máy Real-time PCR.
- Micropipettes và đầu típ có lọc, hút ở các thể tích 0.5 – 10ul; 10 – 100ul và 100 – 1000ul.
- Các đĩa nhựa 96 giếng hoặc ống nhựa chứa dung dịch tách biết, phù hợp với máy tách chiết.
- Ống PCR 200ul hoặc đĩa PCR 200ul 96 giếng.
- Chai thủy tinh 500 – 1000ml.
- Ống eppendorf 0.5 và 1.5ml.
- Ống ly tâm nhưa 5ml, 10ml và 50ml.
- Bút viết, đồng hồ chuyên dụng trong phòng thí nghiệm và các dụng cụ cần thiết khác..
Để biết thêm thông tin chi tiết về các loại nguyên liệu, dụng cụ thiết bị được sử dụng trong quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm hoặc có nhu cầu mua hàng, quý anh chị và các bạn có thể gửi về địa chỉ maik: info@visitech.vn hoặc có thể trực tiếp liên hệ qua hotline của Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh.