Nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm

Nguyên tắc:

Những nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV:

1. Nguyên liệu sinh học:

• Đoạn primers và đoạn dò (probe) cho virus WSSV: WSSV1011F, WSSV1079R, WSSV-p.
• Đoạn primer và đoạn dò (probe) cho quá trình kiểm soát tách chiết: 18S Forward; 18S Reverse; 18S Probe.
• Hệ thống đối chứng cần có trong quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm:

• Hệ thống đối chứng kiểm soát quá trình tách DNA:

2. Nguyên liệu hóa học:

• Dung dịch Phosphate Buffered Saline (PBS)

• Cồn 90% và 70%.
• Kit tách chiết DNA/RNA.
• Master Mix hoặc kit tương đương.

3. Thiết bị, dụng cụ cần có:

• Máy Vortex (trộn mẫu).
• Nồi hấy khử trùng Autoclave.
• Máy ly tâm nhỏ (Centrifuge spin).
• Máy lắc và ủ nhiệt (nhiệt độ từ 37 – 100^oC).
• Tủ an toàn sinh học cấp 2
• Máy tách chiết RNA/DNA tự động.
• Máy ly tâm lạnh cho eppendorf 1.5ml.
• Tủ lạnh lưu trữ ở các nhiệt độ: 4^oC, -20^oC, -80^o
• Máy Real-time PCR.
• Micropipettes và đầu típ có lọc, hút ở các thể tích 0.5 – 10ul; 10 – 100ul và 100 – 1000ul.
• Các đĩa nhựa 96 giếng hoặc ống nhựa chứa dung dịch tách biết, phù hợp với máy tách chiết.
• Ống PCR 200ul hoặc đĩa PCR 200ul 96 giếng.
• Chai thủy tinh 500 – 1000ml.
• Ống eppendorf 0.5 và 1.5ml.
• Ống ly tâm nhưa 5ml, 10ml và 50ml.
• Bút viết, đồng hồ chuyên dụng trong phòng thí nghiệm và các dụng cụ cần thiết khác..