Trong mỗi quy trình thực hiện Real-time PCR đều có những nguyên liệu giống và khác nhau, vậy nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm bao gồm những gì? Các bạn tham khảo qua bài viết này nhé.
Xem thêm bài viết
Tiêu chuẩn cơ sở của Cục Thú y – Real-time PCR phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) ở tôm
Lượng hóa chất trên được cho vào bình thủy tinh, cho nước cất vào vừa đủ 1 ít, hòa tan hoàn toàn, pH 7.2 và đem hấp vô trùng 121oC trong 15 phút.
Nguyên tắc:
Virus gây hội chứng đốm trắng ở tôm được phát hiện bằng kỹ thuật Real-time PCR với primer xuôi WSSV1011F, primer ngược WSSV1029R và đoạn dò Taqman Probe WSSV-p.Những nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV:
-
Nguyên liệu sinh học:
- Đoạn primers và đoạn dò (probe) cho virus WSSV: WSSV1011F, WSSV1079R, WSSV-p.
- Đoạn primer và đoạn dò (probe) cho quá trình kiểm soát tách chiết: 18S Forward; 18S Reverse; 18S Probe.
- Hệ thống đối chứng cần có trong quy trình Real-time PCR phát hiện virus WSSV ở tôm:
- Hệ thống đối chứng kiểm soát quá trình tách DNA:
-
Nguyên liệu hóa học:
- Dung dịch Phosphate Buffered Saline (PBS)
Thành phần | Số lượng (gram) |
NaCl | 8.0 |
KCl | 0.2 |
Na2HPO4 | 1.15 |
KH2PO4 | 0.2 |
- Cồn 90% và 70%.
- Kit tách chiết DNA/RNA.
- Master Mix hoặc kit tương đương.
-
Thiết bị, dụng cụ cần có:
- Máy Vortex (trộn mẫu).
- Nồi hấy khử trùng Autoclave.
- Máy ly tâm nhỏ (Centrifuge spin).
- Máy lắc và ủ nhiệt (nhiệt độ từ 37 – 100oC).
- Tủ an toàn sinh học cấp 2
- Máy tách chiết RNA/DNA tự động.
- Máy ly tâm lạnh cho eppendorf 1.5ml.
- Tủ lạnh lưu trữ ở các nhiệt độ: 4oC, -20oC, -80o
- Máy Real-time PCR.
- Micropipettes và đầu típ có lọc, hút ở các thể tích 0.5 – 10ul; 10 – 100ul và 100 – 1000ul.
- Các đĩa nhựa 96 giếng hoặc ống nhựa chứa dung dịch tách biết, phù hợp với máy tách chiết.
- Ống PCR 200ul hoặc đĩa PCR 200ul 96 giếng.
- Chai thủy tinh 500 – 1000ml.
- Ống eppendorf 0.5 và 1.5ml.
- Ống ly tâm nhưa 5ml, 10ml và 50ml.
- Bút viết, đồng hồ chuyên dụng trong phòng thí nghiệm và các dụng cụ cần thiết khác..
[…] bị mẫu (Chuẩn bị đầy đủ Nguyên vật liệu để thực hiện Quy […]