Quy trình thực hiện với Bộ Kit Realtime PCR Kiểm Tra YHV

Giới thiệu về Bộ Kit Realtime PCR kiểm tra YHV:

Mục đích sử dụng:

Kit Realtime PCR kiểm tra YHV được dùng để Kiểm tra  sự hiện diện RNA của virus YHV trên mẫu tôm bằng kỹ thuật Realtime PCR.

Có thể phát hiện nhanh virus gây bệnh đốm trắng WSSV và bệnh đầu vàng YHV trên tôm bằng cách nào?

Điều kiện lưu trữ:  -20 oC

Hạn sử dụng: 6 tháng kể từ ngày sản xuất.

Lưu ý trước khi sử dụng:

– Đọc kỹ hướng dẫn sử dụng trước khi dùng.

– Sử dụng găng tay cho mọi thao tác. Thay găng tay thường xuyên cho mỗi loại thao tác khác nhau.

Thành phần bộ kit gồm có:

Bộ hóa chất tách DNA (SRD Buffer, RDW1 Buffer, RDW2 Buffer…) và Bộ hóa chất Realtime PCR (YHV Mix, qRT-PCR mix, enzyme RT tube 0.2ml, chứng dương WSSV).

Quy trình thực hiện đối với Bộ Kit Realtime PCR Kiểm Tra YHV:

1.Thu và bảo quản mẫu

  • Thu mẫu: Đối với mẫu tôm hậu ấu trùng: lấy nguyên lượng mẫu không quá 0.2 g. – Đối với tôm thương phẩm và tôm bố mẹ: lấy một phần mang (đã loại bỏ vỏ) hoặc gốc chân bơi.
  • Bảo quản mẫu: Mẫu phải được lấy khi tôm còn sống và bảo quản ngay trong cồn 95%.  Lưu giữ ở nhiệt độ 4-25oC trong 1 tuần.

2. Tách chiết DNA:

Thực hiện các bước tách chiết theo quy trình được ghi trên Hướng dẫn sử dụng.

3. Thực hiện phản ứng PCR:

Chuẩn bị mỗi phản ứng Real-time PCR WSSV Mix bao gồm qPCR mix và WSSV Mix.

  • Hút DNA của mẫu kiểm tra, chứng âm tách chiết, chứng dương cho vào hỗn hợp Real-time PCR WSSV Mix.
  • Chỉ nên chuẩn bị vừa đủ số phản ứng cần thực hiện để đảm bảo chất lượng bộ kit tốt nhất.

Chú ý:

  • Mỗi lần chạy nên có ít nhất 1 chứng dương, 1 chứng âm (với nước cất 2 lần) và chứng âm tách chiết.
  • Thứ tự chuẩn bị phản ứng: Chứng âm, chứng âm tách chiết, mẫu xét nghiệm và chứng dương
  • Sau khi đặt phản ứng nên spin down tube PCR để dung dịch trong tube nằm hoàn toàn dưới đáy ống, sau đó đặt tube vào trong máy.

 Khai báo màu huỳnh quang FAM, HEX cho các mẫu theo hướng dẫn sử dụng của máy real-time PCR. Cài đặt chương trình nhiệt cho Realtime PCR.

4. Phân tích kết quả

  • Mẫu âm tính với WSSV: chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu
  • Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng real-time PCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại DNA.
  • Mẫu dương tính với WSSV: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tmục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.
  • Bảng tóm tắt phân tích kết quả
    STT YHV (FAM) IC (HEX) Kết luận
    1 + Mẫu âm tính với WSSV
    2 + -/+ Mẫu dương tính với WSSV
    3 Không thể kết luận

     

Bộ Kit này phù hợp với 2 dòng máy hiện có, phổ biến trên thị trường là Máy Realtime PCR MyGo miniMáy Realtime PCR MygoPro.

Trên đây là thông tin đầy đủ, cũng như hướng dẫn cơ bản các thao tác thực hiện với Bộ Kit Realtime PCR Kiểm Tra YHV. Để biết thêm chi tiết hơn, quý anh chị và các bạn vui lòng gửi về địa chỉ mail: info@visitech.vn hoặc liên hệ trực tiếp qua hotline của Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh.

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *

Hotline: 0919.112.141
Zalo
Gọi điện ngay