CHUẨN BỊ THÀNH PHẦN PHẢN ỨNG REALTIME PCR

Từ những phản ứng PCR, điện di thông thường hay RT-PCR… đến cao cấp hơn một chút là realtime PCR đều cần thực hiện bước đầu tiên là chuẩn bị thành phần phản ứng. Bài viết này sẽ giới thiệu thành phần phản ứng realtime PCR bao gồm những gì nhé.

I. Thành phần phản ứng realtime PCR:

• Nước cất.
• Dung dịch đệm (buffer): thường là KCl hoặc Tris-HCl.
• Mg²⁺.
• Enzyme Taq polymerase.
• dNTP (nguyên liệu tổng hợp mạch mới: 4 loại nu).
• Primer: 2 loại primer ngược và primer xuôi (khuếch đại đúng đoạn gene mục tiêu).
• Đầu dò huỳnh quang hoặc có thể dùng chất phát quang như SYBR Green.
• DNA, cDNA hoặc RNA mạch khuôn.

Ngoài những thành phần tương tự như ở phản ứng PCR thông thường, ở realtime PCR có xuất hiện thêm một thành phần là đầu dò huỳnh quang, đầu dò này bám trên DNA khuôn, giúp phát hiện và theo dõi số lượng sản phẩm nhân bản.

Xem thêm Chuẩn bị, sử dụng và lưu trữ Môi trường nuôi cấy vi sinh bột khô

II. Cách chuẩn bị các thành phần phản ứng realtime PCR:

1. Trộn các thành phần đơn lẻ:

• Cho lần lượt các thành phần vào ống chứa phản ứng (DNA, cNDA, RNA mạch khuôn được cho vào cuối cùng).
• Ở lần thực hiện phản ứng realtime PCR đầu tiên, nên thực hiện mix các thành phần theo công thức cho sẵn; sau đó có thể tiến hành tối ưu hóa thay đổi nồng độ để phản ứng hoạt động tốt hơn.

2. Cách chuẩn bị phản ứng realtime PCR với loại thành phần được trộn sẵn (mastermix/ supermix):

• • Đây là cách chuẩn bị tiết kiệm thời gian hơn rất nhiều so với cách trộn các thành phần đơn lẻ.
  • Mastermix hay Supermix là hỗn hợp chứa phần lớn các thành phần chính của phản ứng (Taq polymerase, Mg²⁺, dNTP, buffer, SYBR Green).
  • Khi sử dụng Mastermix/ Supermix, có thể giảm thiểu thao tác hút từng thành phần bằng pipette; do đó, giảm thiểu việc xảy ra sai số.

Đối với những phòng thí nghiệm trường học hay nghiên cứu, thông thường sẽ sử dụng loại thành phần đơn lẻ để tối ưu hóa quy trình, đưa ra 1 quy trình chuẩn; còn riêng đối với các phòng thí nghiệm dịch vụ hay bệnh viện, thời gian là rất quan trọng, do đó đa số họ dùng loại supermix/ mastermix thay vì các thành phần đơn lẻ như trước đây.

Để được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc, hướng dẫn sử dụng và báo giá cụ thể, hãy liên hệ ngay với Visitech – Công ty TNHH Khoa học Kỹ thuật Việt Sinh qua các thông tin bên dưới:

• Email: info@visitech.vn – pkd@visitech.vn
• Hotline: 0919.112.141 – 0916.07.23.23
• Website: http://visitech.vn/
• Địa chỉ: 539 Lũy Bán Bích, P. Phú Thạnh, Q. Tân Phú, TPHCM