Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Nitrofurazone Metabolite (SEM) trong Thủy Sản

Các bước chuẩn bị trước khi thực hiện thao tác với Bộ Kit ELISA:

Trong Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Nitrofurazone Metabolite (SEM) trong Thủy Sản, cần pha loãng nồng độ các dung dịch để xử lý mẫu và thực hiện thao tác với Kit. Xem thêm bài viết Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Aminohydantoin Hydrochloride (AHD) trong Thủy Sản

Độ nhạy: 0.05 ppb (ng/mL)

Chuẩn bị dung dịch:

• 1: Dung dịch K₂HPO₄1M: Hòa tan 11.4g K₂HPO_4.3H₂O trong 500ml nước.
• 2: Dung dịch HCl 1M: Pha loãng 8.6ml HCl đậm đặc trong 91.4ml nước cất.
• 3: Dung dịch NaOH 1M: Hòa tan 4g NaOH trong 100ml nước cất.
• 4: Reconstitution Buffer: Pha loãng 2xReconstitution0 buffer với nước cất theo tỷ lệ 1:1. Bảo quản ở 4^oC trong vòng 1 tháng.
• 5: Wash buffer: Pha loãng 20xConcentrated Wash Buffer với nước cất (Wash buffer : Nước cất theo tỷ lệ (V) 1:19).

Xử lý mẫu:

1. Cân 1 ± 0.05g mẫu đã được đồng nhất vào ống ly tâm 50ml. Thêm 4mL nước cất 0.5 ml HCl (1M) và 100 µl Derivatization solution, vortex 5 phút.
2. Ủ 37oC qua đêm hoặc ủ ở 50oC/ 3h trong bể điều nhiệt.
3. Thêm 5ml K₂PO₄ (0.1M), 0.4ml NaOH (1M), 5ml ethyl acetate, vortex 5 phút. Ly tâm 4000vòng trong 10 phút ở nhiệt độ phòng.
4. Lấy 2.5mL phần dịch nổi cho vào tube sạch và thổi khô ở 50 – 60^oC bằng khí Nitơ hoặc không khí.
5. Thêm vào 1mL N-hexane và lắc trong vòng 2 phút. Sau đó thêm vào 1mL Reconstitution buffer và lắc trong 30 giây để hòa tan hoàn toàn, ly tâm 4000vòng trong 10phút.
6. Loại bỏ phần dịch nổi N-hexane, lấy 50µl phần dịch phía dưới để phân tích.

Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Nitrofurazone Metabolite (SEM) – Thao tác với Kit Elisa:

1. Thêm mẫu: Hút 50µl Standard hoặc mẫu vào mỗi giếng, sau đó thêm 50µl Enzyme HRP conjugate vào. Thêm 50µl antibody working solution vào mỗi giếng. Lắc nhẹ trong 5s để trộn và phủ bằng sealer. Ủ trong 45phút ở 25^o
2. Rửa: Loại bỏ dung dịch trong mỗi giếng. Lập tức thêm 250 µl wash buffer vào mỗi giếng và rửa. Lặp lại 5 lần, mỗi lần khoảng 30s. Lật ngược khay giếng đổ bỏ dịch rửa và úp vào khăn giấy sạch (chú ý tránh tạo bọt trong giếng, nếu có bọt sử dụng đầu tip để sạch để loại bỏ).
3. Tạo màu: Thêm 50 µl dung dịch Substrate A vào mỗi giếng, sau đó cho thêm vào 50 µl dung dịch Substrate B. Lắc nhẹ trong 5s để  trộn đều. Ủ trong 15 phút ở 25^oC trong điều kiện tối.
4. Ngừng phản ứng: Thêm 50 µl dung dịch Stop vào mỗi giếng, lắc nhẹ để trộn hoàn toàn.
5. Đo OD: Bước sóng 450 (Bước sóng kép 450/630nm). Nên thực hiện bước này sau khi ngưng phản ứng trong 10 phút.

Trên đây là Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Nitrofurazone Metabolite (SEM) trong Thủy Sản. Để biết thêm thông tin về bộ Kit ELISA Kiểm Tra Dư lượng Kháng sinh, quý anh chị và các bạn vui lòng gửi về địa chỉ mail: info@visitech.vn hoặc liên hệ qua hot line của Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh.