Hướng dẫn sử dụng KIT ELISA Kiểm Tra Norfloxacin trong Thủy Sản

Các bước chuẩn bị trước khi thực hiện với Kit Elisa:

Chuẩn bị dung dịch:

1. 1M dung dịch HCl: lấy 860µl HCl (36.5%) hòa vào 100mL nước cất.
2. Dung dịch Acetonitrile : Dichloromethane trộn theo tỷ lệ 1:4.
3. Dung dịch Buffer 0.02M (pH: 7.2): Cân 5.16g Na₂HPO₄.12H₂O và 0.87g NaH₂PO4.2H₂O vào 1L nước cất.
4. Hỗn hợn dung dịch Acetonitrile – Dichloromethane – 0.1M HCl: Trộn 80mL Acetonitrite và 20mL Dichloromethane, sau đó thêm vào 5mL dung dịch HCl 0.1M.
5. Pha loãng 2 lần dung dịch đã trộn với nước cất theo tỉ lệ 1:1 (1mL dung dịch trộn + 1mL nước cất). Dung dịch pha loãng là dung dịch cần sử dụng.

Chuẩn bị mẫu:

1. Cân 2.0 ± 0.05g mẫu đã được đồng nhất vào ống ly tâm 50ml.
2. Thêm 8mL dung dịch Acetonitrite (CH₃CN) – Dichloromethane , lắc nhẹ trong 5phút, ly tâm 4000vòng trong 10 phút ở 15^oC.
3. Lấy 4mL phần dịch nổi cho vào tube sấy khô ở 56^oC.
4. Hòa tan phần sấy khô bằng 1mL dung dịch pha loãng, thêm vào 1mL N-hexane, trộn trong 30 phút, ly tâm 4000vòng trong 5phút ở 15^oC.
5. Loại bỏ phần dịch nổi, lấy 50µl phần dịch phía dưới để phân tích.

Quy trình Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Norfloxacin:

1. Lấy những phản ứng cần thiết ra ngoài và đặt ở nhiệt độ phòng (20 – 25^oC) trong ít nhất 30p.
2. Lấy khay giếng ra và đặt trên mặt phẳng ngang. Cất phần còn lại chưa sử dụng, bảo quản ở 2 – 8 ^oC.
3. Chuẩn bị dung dịch: pha loãng 20 lần washing buffer với nước cất theo tỷ lệ 1:19 để sử dụng.
4. Số thứ tự của giếng được sắp xếp từ mẫu và các dung dịch chuẩn. Mỗi mẫu và dung dịch chuẩn nên được nhân 2.
5. Cho 50 µl dung dịch mẫu và dung dịch chuẩn vào các giếng. Thêm 50µl enzyme tổng hợp, sau đó thêm 50µl dung dịch kháng thể vào mỗi giếng. Trộn bằng cách lắc nhẹ, dung màng che đậy các giếng và ủ tring 30phút ở 25^o
6. Rửa bằng washing buffer, mỗi giếng sử dụng 250 µl từ 4 đến 5 lần, ngâm giếng với dung dịch washing buffer từ 15-30 giây. Làm khô bằng giấy thấm (khan giấy).
7. Đổi màu: Thêm 50µl chất nền A và 50µl dung dịch B vào mỗi giếng. Trộn bằng cách lắc nhẹ, ủ trong 15phút ở 25^oC.
8. Thêm 50µl dung dịch Stop vào mỗi giếng, trộn bằng cách lắc nhẹ. Đo OD với bước sóng 450/630.