Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Malachite Green oxalate (MG) trong Thủy Sản

Độ nhạy: 0.025 ppb (ng/mL)

Trong Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Malachite Green oxalate (MG) trong Thủy Sản, cần pha loãng nồng độ các dung dịch để xử lý mẫu và thực hiện thao tác với Kit. Xem thêm bài viết 

Chuẩn bị mẫu thuốc thử:

• Thuốc thử 1: Dung dịch hòa tan. Lấy 10mL dung dịch hòa tan 10X, thêm vào 50mL nước cất và 40mL methanol, trộn đều.

Thuốc thử 2: Wash buffer. Pha loãng 20 lần dung dịch Wash Buffer với nước cất (Wash buffer : Nước cất theo tỷ lệ (V) 1:19).

Xử lý mẫu:

1. Cân 1g mẫu đồng nhất cho vào ống ly tâm 50mL. Thêm 0.3mL Acetonitrile và 6mL ethyl acetate, Lắc mạnh (vortex), ít nhất là trong 5phút.
2. Ly tâm 4000vòng trong 10 phút ở nhiệt độ phòng. Lấy 3mL phần nổi phía trên cho vào một ống tube mới và khô, thêm vào 50µl oxygenant và vortex trong 2 phút.
3. Thêm 50µL cosolvent vào tube, làm khô bằng thiết bị bay hơi nitơ trong điều kiện bồn nước ở 50^oC (Nên có 1 giọt chất lỏng ở đáy ống sau khi sấy, chất lỏng dính màu vàng trong ống nghiệm nếu hàm lượng lipid trong mẫu quá cao).
4. Thêm 1mL dung dịch Redissovle 1X và trộn đều. Dùng 50µl để phân tích.

Chuẩn bị dung dịch chuẩn (Standard):

Thêm 3mL dung dịch hòa tan vào dung dịch chuẩn 0ppb; 1.5mL dung dịch hòa tan dùng cho 0.025ppb, 0.05ppb, 0.1 ppb và 0.2 cho dung dịch chuẩn. Và 2.88mL dung dịch hòa tan cho 0.4 ppb dung dịch chuẩn.

• Strandard 6: Lấy 120 µl High Concentrated Standard (10ppb) vào 2.88mL dung dịch hòa tan. Sau đó trộn đều, nồng độ đạt 0.04ppb.
• Standard 5: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 6 vào 1.5mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 0.2ppb.
• Standard 4: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 5 vào 1.5mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 0.1ppb.
• Standard 3: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 4 vào 1.5mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 0.05ppb.
• Standard 2: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 3 vào 1.5mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 0.025ppb.
• Standard 1: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 2 vào 1.5mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng cuối độ là 0.

Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Malachite Green oxalate (MG) – Thao tác với Kit:

1. Number: Số của mẫu và dung dịch chuẩn được đánh theo thứ tự.
2. Thêm 50µl Standard hoặc mẫu vào mỗi giếng, sau đó thêm 50µl Antibody Working solution. Lắc nhẹ trong 5s để trộn. Ủ trong 30phút ở 25^oC trong bóng tối.
3. Rửa: Loại bỏ chất lỏng trong mỗi giếng. Lập tức thêm 250 µl wash buffer vào mỗi giếng và rửa. Lặp lại 5 lần, mỗi lần khoảng 30s. Lật ngược khay giếng đổ bỏ dịch rửa và úp vào khăn giấy sạch (chú ý tránh tạo bọt trong giếng, nếu có bọt sử dụng các mẹo để làm sạch để loại bỏ).
4. Thêm hỗn hợp HRP: Thêm 100 µl dung dịch HRP Conjugate vào mỗi giếng, ủ 30phút ở 25^oC trong bóng tối.
5. Wash: Lặp lại bước 3.
6. Tạo màu: Thêm 50 µl dung dịch chất nền A vào mội giếng, sau đó cho thêm vào mỗi giếng 50 µl dung dịch B. Lắc nhẹ trong 5s để  trộng đều. Ủ trong 15 phút ở 25^oC trong bóng tối.
7. Ngừng phản ứng: Thêm 50 µl dung dịch Stop vào mỗi giếng, lắc nhẹ để trộn hoàn toàn.
8. Đo OD: Bước sóng 450 (Bước sóng kép 450/630nm). Nên thực hiện bước này sau khi ngưng phản ứng trong 10 phút.

Trên đây là Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Malachite Green oxalate (MG) trong Thủy Sản. Để biết thêm thông tin về bộ Kit ELISA Test Dư lượng Kháng sinh trong Thủy Sản, quý anh chị và các bạn vui lòng gửi về địa chỉ mail: info@visitech.vn hoặc liên hệ qua hot line của Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh.