Dư lượng kháng sinh thủy sản
Hướng dẫn Sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Sulfonamides (SAs) trong Thủy Sản
Các bước cần chuẩn bị trước khi thực hiện thao tác với Bộ Kit ELISA:
Trong Hướng dẫn Sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Sulfonamides (SAs) trong Thủy Sản, cần pha loãng nồng độ các dung dịch để xử lý mẫu và thực hiện thao tác với Kit. Xem thêm Độ nhạy: 0.5 ppb (ng/ml)Chuẩn bị dung dịch hóa chất
Dung dịch 1: Dung dịch PB Buffer. Cân 2.58g Na2PO4.12H2O và 0.4g Na2HPO4.3H2O với 500ml nước cất. Dung dịch 2: Reconstitution Buffer. Pha loãng 2xReconstitution Buffer với nước cất theo tỷ lệ V là 1 : 1. Bảo quản ở nhiệt độ 4oC trong vòng 1 tháng. Dung dịch 3: Wash Buffer. Pha loãng 20xConcentrated Wash Buffer với nước cất theo tỷ lệ 1 : 19.Chuẩn bị mẫu
- Cân 3 ±0.05 g mẫu đã đồng hóa vào tube, thêm 3ml PB Buffer (0.02M), trộn đều 5s. Thêm 4ml ethyl acetate và 2ml acetonitrile. Vortex 10 phút, ly tâm ở 4000rpm/10 phút ở nhiệt độ phòng.
- Lấy 2mL dịch nổi sang tube 1.5ml mới, thổi khô bằng nitrogen hoặc không khí ở nhiệt độ 50 – 60oC.
- Hòa cặn với 1ml N-hexane, thêm 1ml Reconstitution buffer và lắc trong 1 phút để trộn đều. Ly tâm 4000rpm/ 5phút ở nhiệt độ phòng.
- Loại bỏ lớp N-hexane bên trên, lấy 50 µl phần dịch để phân tích.
Hướng dẫn Sử dụng Kit ELISA Kiểm tra Sulfonamides (SAs) – Thao tác với Kit Elisa
- Thêm mẫu: Hút 50ul dung dịch chuẩn và mẫu phân tích vào giếng khác nhau. Thêm 50 µl Enzyme HRP conjugate, sau đó thêm 50 µl Antibody working solution vào mỗi giếng, trộn bằng cách lắc nhẹ, phủ bằng sealer. Lắc nhẹ 5s. Ủ 25oC/ 45 phút trong điều kiện tối.
- Rửa: Đổ bỏ phần dung dịch, tiến hành rửa bằng cách thêm 250ul dung dịch Wash Buffer vào mỗi giếng. Lặp lại 5 lần, mỗi lần 30s. Làm khô bằng cách đập nhẹ lên khăn giấy (nếu có bọt khí, dùng đầu tip sạch để lấy ra).
- Phát triển màu: Thêm 50ul substration solution A vào mỗi giếng, thêm 50ul substrate solution B, lắc nhẹ 5s, ủ 25oC/15 phút ở trong điều kiện tối.
- Dừng phản ứng: Thêm 50ul stop solution vào mỗi giếng, lắc nhẹ. Đọc kết quả ở bước sóng 450/630nm.
