Hướng dẫn Sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Chloramphenicol (CAP) trong Thủy Sản

Các bước chuẩn bị trước khi thao tác với Bộ Kit ELISA:

Chuẩn bị dung dịch hóa chất

• 1: Reconstitution Buffer: Pha loãng Reconstitution Buffer 2x với nước cất theo tỷ lệ 1:1. Bảo quản ở 4^oC trong vòng 1 tháng.
• 2: Wash Buffer: Pha loãng Concentrated Wash Buffer 20x với nước cất theo tỷ lệ 1 : 19.

Chuẩn bị mẫu

1. Cân 3 ± 0.05 g mẫu đã đồng hóa vào tube 50mL, thêm 3ml nước cất, vortex 5 phút. Sau đó thêm 6mL ethyl acetate và vortex trong 5 phút. Ly tâm ở 4000rpm/10 phút ở nhiệt độ phòng.
2. Lấy 2mL dịch nổi sang tube mới và thổi khô bằng nitrogen hoặc không khí.
3. Hòa tan trong 1mL N-hexane, thêm 0.5ml Reconstitution và trộn trong 30s. Ly tâm 4000vòng/ 5 phút.
4. Loại bỏ lớp N-hexane và hút 50 µl dịch nổi để phân tích.

Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Kiểm Tra Chloramphenicol (CAP) – Thao tác với Kit Elisa

1. Thêm mẫu: Hút 50µl dung dịch chuẩn và mẫu phân tích vào giếng khác nhau. Thêm 50ul antibody working solution, phủ bằng sealer. Lắc nhẹ trong 5s. Ủ ở 25^oC/ 30 phút trong điều kiện tối.
2. Rửa: Đổ bỏ dung dịch trong giếng. Thêm 250 µl dung dịch Wash Buffer vào mỗi giếng và rửa. Lặp lại 5 lần, mỗi lần 30s (Tránh tạo bọt khí trong giếng, nếu có dùng đầu tip sạch để loại bỏ).
3. HRP Conjugate: Thêm 100 µl HRP conjugate vào mỗi giếng. Ủ 30 phút ở 25^oC trong bóng tối.
4. Rửa: Lặp lại bước 2.
5. Phát triển màu: Thêm 50 µl substration solution A vào mỗi giếng, thêm 50 µl substrate solution B, lắc nhẹ 5s, ủ 25^oC/15 phút ở trong điều kiện tối.
6. Dừng phản ứng: Thêm 50 µl stop solution vào mỗi giếng, lắc nhẹ 5s. Đọc kết quả ở bước sóng 450/630nm.