Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Enrofloxacin trong Thủy Sản

Độ nhạy: 0.2 ppb (ng/mL)

Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Enrofloxacin bao gồm các bước chuẩn bị dung dịch và xử lý mẫu trước khi thực hiện thao tác với Kit.

Chuẩn bị dung dịch:

• 1: Dung dịch HCl 0.15M: Lấy 5mL dung dịch Concentrated hydrochloric acid (HCl) cho vào 400mL nước cất, trộn đều.
• 2: Dung dịch ly trích mẫu: Cho 10mL HCl 0.15M vào 90mL anhydrous acetonitrile, trộn đều.
• 3: Reconstitution Buffer: Pha loãng 5xReconstitution buffer với nước cất theo tỷ lệ 1:4. Bảo quản ở 4^oC trong vòng 1 tháng.
• 4: Wash buffer: Pha loãng 20xConcentrated Wash Buffer với nước cất (Wash buffer : Nước cất theo tỷ lệ (V) 1:19).

Xử lý mẫu:

1. Cân 2.0 ± 0.05g mẫu đã được đồng nhất vào ống ly tâm 50ml.
2. Thêm 8mL dung dịch Sample Extraction Solution (Solution 2), lắc trong 5phút, ly tâm 4000vòng trong 10 phút ở nhiệt độ phòng.
3. Lấy 2mL phần dịch nổi cho vào tube sạch và sấy khô ở 50 – 60^oC bằng khí Nitơ hoặc không khí.
4. Thêm vào 1mL N-hexane và lắc trong vòng 2 phút. Thêm vào 1mL Reconstitution buffer và vortex trong 30 giây để hòa tan hoàn toàn, ly tâm 4000vòng trong 5phút ở nhiệt độ thường.
5. Loại bỏ phần dịch nổi N-hexane, lấy 50µl phần dịch phía dưới để phân tích.

Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Enrofloxacin – Quy trình với kit:

• Thuốc thử được trộn bằng tay trước khi hút, tránh tạo bọt.

1. Number: Số của mẫu và dung dịch chuẩn được đánh theo thứ tự.
2. Thêm 50µl dung dịch Standard và mẫu vào mỗi giếng, sau đó thêm 50µl HRP Conjugate vào. Thêm 50µl antibody working solution. Lắc nhẹ trong 5s để trộn và sử dụng màng che (sealer). Ủ trong 45phút ở 25^o
3. Rửa: Loại bỏ chất lỏng trong mỗi giếng. Lập tức thêm 250 µl wash buffer vào mỗi giếng và rửa. Lặp lại 5 lần, mỗi lần khoảng 30s. Lật ngược khay giếng đổ bỏ dịch rửa và úp vào khăn giấy sạch (chú ý tránh tạo bọt trong giếng, nếu có bọt sử dụng các mẹo làm sạch để loại bỏ).
4. Tạo màu: Thêm 50 µl dung dịch Substrate A vào mỗi giếng, sau đó cho thêm vào 50 µl dung dịch Substrate B. Lắc nhẹ trong 5s để  trộn đều. Ủ trong 15 phút ở 25^oC trong bóng tối.
5. Ngừng phản ứng: Thêm 50 µl dung dịch Stop vào mỗi giếng, lắc nhẹ để trộn hoàn toàn.
6. Đo OD: Bước sóng 450 (Bước sóng kép 450/630nm). Nên thực hiện bước này sau khi ngưng phản ứng trong 10 phút.