Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Doxycycline trong Thủy Sản

Độ nhạy:  0.05 ppb (ng/ml)

Chuẩn bị dung dịch hóa chất:

• Dung dịch tách mẫu A: Pha loãng 10mL Sample Extract (10X) với 450mL nước cất hoặc pha loãng dung dịch tách mẫu (10X) với nước theo tỷ lệ 1:9.
• Dung dịch tách mẫu B: Lấy 50ml methanol trộn với 450ml dung dịch tách mẫu A; hoặc trộn methanol với dung dịch tách mẫu A theo tỷ lệ 1:9.
• Dung dịch tách mẫu C: Lấy 100ml methanol trộn với 270 dung dịch tách mẫu A; hoặc trộn methanol với dung dịch tách mẫu A theo tỷ lệ 10:27.
• Washing buffer: pha loãng 15mL Concentrated washing buffer 20x với nước cất theo tỷ lệ 1:19.

Chuẩn bị dung dịch chuẩn (Standard solution):

• Strandard 6: Lấy 50 µl Standard Concentrate (81ppb) trộn với 950 µl Standard redissolving solution. Nồng độ đạt 4.05ppb.
• Standard 5: Lấy 600 µl Standard redissolving solution trộn với 300 µl dung dịch Standard 6. Nồng độ là 1.35ppb.
• Standard 4: Lấy 600 µl Standard redissolving solution trộn với 300 µl dung dịch Standard 5. Nồng độ là 0.45ppb.
• Standard 3: Lấy 600 µl Standard redissolving solution trộn với 300 µl dung dịch Standard 4. Nồng độ là 0.15ppb.
• Standard 2: Lấy 600 µl Standard redissolving solution trộn với 300 µl dung dịch Standard 3. Nồng độ là 0.05ppb.
• Standard 1: Standard redissolbing solution (0ppb).

Chuẩn bị mẫu:

1. Cân 1 ±0.05 g mẫu đã đồng hóa vào tube 50mL, thêm 8ml dung dịch tách mẫu A, lắc 3 phút, ly tâm ở 4000rpm/10 phút ở nhiệt độ 20 – 25^o
2. Hút 50ul dịch nổi để phân tích.

Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Doxycycline (TCs) – Thao tác với Kit:

1. Thêm mẫu: Hút 50ul dung dịch chuẩn và mẫu phân tích vào giếng khác nhau. Thêm 50ul Enzyme conjugate, sau đó 50ul antibody solution vào mỗi giếng. Trộn bằng cách lắc nhẹ đĩa. Phủ bằng sealer và ủ ở 25^oC trong 30 phút.
2. Rửa: Đổ bỏ phần dung dịch, tiến hành rửa giải bằng dung dịch washing buffer với thể tích 250ul từ 15-30 giây, lặp lại 5 lần, làm khô bằng cách đập nhẹ lên khăn giấy ( nếu có bong bóng có thể dung đầu tip sạch để lấy ra).
3. Phát triển màu: thêm 50ul substrate A và sau đó thêm 50ul substrate B vào mỗi giếng. Trộn nhẹ bằng cách lắc, sau đó ủ ở 25^oC trong 15 phút dưới điều kiện tối.
4. Dừng phản ứng: Thêm 50ul stop solution vào mỗi giếng. Trộn đều bằng cách lắc đĩa. Cài đặt bước sóng đọc là 450nm/ 630nm.