Hướng dẫn test nhanh, Dư lượng kháng sinh thủy sản
Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Tetracycline trong Thủy Sản
Độ nhạy: 0.3 ppb (ng/ml)
Trong Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Tetracycline (TCs) trong Thủy Sản, cần pha loãng nồng độ các dung dịch để xử lý mẫu và thực hiện thao tác với Kit. Xem thêm bài viết Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Flouroquinolones (FQNs) trong Thủy SảnChuẩn bị dung dịch hóa chất
- Dung dịch 1: Dung dịch Acid Trichloroacetic 1%. Hòa tan 1g Trichloroacetic acid với 100mL nước cất.
- Dung dịch 2: Reconstitution Buffer. Pha loãng 5xReconstitution Buffer với nước cất theo tỷ lệ V 5xReconstitution Buffer : nước cất là 1 : 4. Bảo quản ở nhiệt độ 4oC trong vòng 1 tháng.
- Dung dịch 3: Wash Buffer. Pha loãng 20xConcentrated Wash Buffer với nước cất theo tỷ lệ 1 : 19.
Chuẩn bị dung dịch chuẩn (Standard solution):
Thêm 3mL Reconstitution buffer vào dung dịch chuẩn 0ppb; 2mL Reconstitution buffer dùng cho 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7 ppb và 8.1 cho dung dịch chuẩn. Và 2.93mL dung dịch hòa tan cho 24.3 ppb dung dịch chuẩn.- Strandard 6: Lấy 73 µl High Concentrated Standard (1.0ppb) vào 2.93mL dung dịch hòa tan. Sau đó trộn đều, nồng độ đạt 24.3ppb.
- Standard 5: Lấy 1 mL dung dịch chuẩn 6 vào 2mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 8.1ppb.
- Standard 4: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 5 vào 1.5mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 2.7ppb.
- Standard 3: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 4 vào 2mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 0.9ppb.
- Standard 2: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 3 vào 2mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng độ là 0.3ppb.
- Standard 1: Lấy 1.5 mL dung dịch chuẩn 2 vào 2mL dung dịch hòa tan, đậy kín và trộn đều. Nồng cuối độ là 0ppb.
Chuẩn bị mẫu
- Cân 2 ±0.05 g mẫu đã đồng hóa vào tube 50mL, thêm 6ml dung dịch trichlorroacetic acid 1%, vortex 2 phút, ly tâm ở 4000rpm/10 phút ở nhiệt độ phòng.
- Lấy 1mL dịch nổi sang tube 1.5ml và thêm 1mL methanol và ủ trong vòng 1 phút. Ly tâm 4000rpm/ 10 phút ở nhiệt độ phòng.
- Lấy 1mL dung dịch phía trên và thổi khô bằng nitrogen hoặc không khí ở nhiệt độ 50 – 60oC. Thêm vào 1mL Reconstitution buffer, trộn đều.
- Hút 50ul mẫu để phân tích.
Hướng dẫn sử dụng Kit ELISA Test Tetracycline (TCs) – Thao tác với Kit:
- Thêm mẫu: Hút 50ul dung dịch chuẩn và mẫu vào giếng khác nhau. Thêm 50ul antibody working solution, phủ bằng sealer. Lắc nhẹ 5s. Ủ 37oC/ 30 phút trong điều kiện tối.
- Rửa: Thêm 250ul dung dịch Wash Buffer vào mỗi giếng. Lặp lại 5 lần, mỗi lần 30s.
- HRP Conjugate: Thêm 100ul HRP conjugate vào mỗi giếng. Ủ 30 phút ở 37oC trong bóng tối.
- Rửa: Lặp lại bước 2.
- Phát triển màu: Thêm 50ul substration solution A vào mỗi giếng, thêm 50ul substrate solution B, lắc nhẹ 5s, ủ 37oC/15 phút ở trong điều kiện tối.
- Dừng phản ứng: Thêm 50ul stop solution vào mỗi giếng, lắc nhẹ 5s. Đọc kết quả ở bước sóng 450/630nm.
