Test nhanh vi sinh vật
Thử nghiệm oxidase xác định vi khuẩn sinh cytochrome c oxidase
Sơ lược về thử nghiệm Oxidase
- Thử nghiệm oxidase được sử dụng để xác định vi khuẩn sinh cytochrome c oxidase, một enzyme của chuỗi vận chuyển điện tử vi khuẩn. Khi hiện diện, cytochrome c oxidase oxy hóa thuốc thử (tetramethyl-p-phenylenediamine) thành (indophenol) sản phẩm có màu tím. Khi không có enzyme, thuốc thử bị khử và không màu.
- Lưu ý: Tất cả vi khuẩn dương tính với oxidase là hiếu khí, và có thể sử dụng oxy như một chất nhận điện tử cuối trong hô hấp. Điều này không có nghĩa chúng là những vi sinh vật hiếu khí nghiêm ngặt. Vi khuẩn có oxidase âm tính có thể là kỵ khí, hiếu khí, hoặc phân biệt tùy ý; kết quả âm tính với oxidase có nghĩa là những sinh vật này không có cytochrome c oxidase để ôxi hóa thuốc thử. Chúngcó thể hô hấp bằng cách sử dụng các oxidase khác trong vận chuyển điện tử.
- Yêu cầu thử nghiệm đối với test Oxidase: Giấy lọc tẩm với cơ chất (1% tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride), hoặc đĩa giấy thương mại, que cấy gỗ hoặc que cấy bạch kim.
Kết quả của xét nghiệm Oxidase
- Dương tính: Xuất hiện màu tím đậm (indophenols) trong vòng 10 giây
- Âm tính: Không có màu
Quy trình thử nghiệm Oxidase:
- Lấy giấy lọc đã ngâm với chất nền dihydrochloride tetramethyl-p-phenylenediamine
- Làm ẩm giấy bằng nước cất vô trùng
- Chọn khuẩn lạc để được thử nghiệm bằng que cấy gỗ hoặc bạch kim và bôi trong giấy lọc
- Quan sát vùng giấy được cấy xem sự thay đổi màu thành xanh đậm hoặc tím trong vòng 10-30 giây
Cần thận trọng trong khi thực hiện xét nghiệm oxidase:
- Không sử dụng que cấy hợp kim niken-base có chứa crom và sắt (nichrome) để lấy khuẩn lạc và bôi khuẩn lạc điều này có thể cho kết quả dương tính giả.
- Giải thích các kết quả trong vòng 10 giây, thời gian là rất quan trọng.
Hiện nay trên thị trường có nhiều loại đĩa giấy để test oxidase rất tiện dụng, ví dụng như:
- Bactident® Oxidase – Merck
- Oxidase discs – Bioanalyse
- Đĩa sinh học Oxidase – Việt Nam
