Sử dụng hóa chất sinh học phân tử
Quy trình Kỹ thuật Real-time PCR phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) ở tôm
Sơ đồ thực hiện Quy trình thực hiện Kỹ thuật Real-time PCR phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) ở tôm:
Mẫu bệnh phẩm -> Đồng nhất mẫu trong dung dịch PBS -> Tách chiết DNA -> Real-time PCR -> Đọc kết quả.-
Chuẩn bị mẫu (Chuẩn bị đầy đủ Nguyên vật liệu để thực hiện Quy trình):
- Mẫu được sử dụng để xét nghiệm với Quy trình thực hiện Kỹ thuật Real-time PCR phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) ở tôm thường là mẫu tươi, ngoài ra có thể là mẫu được cố định trong cồn 90%. Các bộ phận như: Giáp đầu ngực, đuôi, mang, chân bơi, máu, cơ bụng hoặc ấu trùng (của các loài như tôm sú, tôm thẻ chân trắng…
- Dùng kẹp và kéo vô trùng để thao tác cắt lấy mẫu. Chia làm 2 phần: 1 cho xét nghiệm và 1 để lưu trữ.
- Mẫu được nghiền nhuyễn trong dung dịch muối đệm PBS (Phophate Buffered Saline) theo tỷ lệ thể tích 1:9. Cho huyễn dịch vào ống nắp vặn vô trùng và đưa vào tủ âm sâu (-80oC) tối thiếu 1h trước khi tách chiết.
-
Tách chiết DNA:
- Quy trình tách chiết thực hiện theo hướng dẫn của bộ Kit.
-
Thực hiện phản ứng Real-time PCR:
-
- Đặt tube PCR hoặc đĩa PCR 96 giếng chứa thành phần phản ứng Real-time PCR (Master Mix) và mẫu DNA vào máy Real-time PCR. Vận hành máy và cài đặt chương trình theo Hướng dẫn.
- Chuẩn bị Master Mix và chu kỳ luân nhiệt (Chi tiết xin vui lòng liên hệ về Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh).
-
Đọc kết quả:
- Mẫu đối chứng âm phải cho kết quả âm tính.
- Mẫu đối chứng dương phải cho kết quả dương tính và có giá trị Ct trùng khớp với giá trị Ct của mẫu đã được chuẩn độ trước đó.
- Nếu 1 trong 4 hệ thống mẫu đối chứng không đúng thì phải thực hiện lại xét nghiệm.
Giải thích kết quả phản ứng Real-time PCR phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) ở tôm.
- Thực hiện 45 chu kỳ:
