Năm 2019, tại Trung quốc, AHPNS là thuật ngữ để chỉ hội chứng hoại tử gan tụy cấp, viết tắt của từ Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome, một trong những nguyên nhân làm tôm thẻ chân trắng và tôm thẻ chết trong ở giai đoạn 35 ngày thả nuôi. Vậy AHNPD là gì?
AHNPD là bệnh gì
Đến năm 2013, các nhà khoa học đã tìm ra nguyên nhân gây bệnh tôm chết sớm (bệnh EMS trên tôm), chính là do vi khuẩn Vibrio parahemolyticus chứa gene gây độc. Và hội chứng AHNPS được phát triển thành bệnh hoại tử gan tụy cấp (Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease) nguyên nhân gây ra bệnh chết sớm trên tôm. Ngoài ra gười ta còn dùng thuật ngữ AHPND/ EMS để chỉ về căn bệnh này.
Bệnh tôm chết sớm (Early Mortality Syndrome – EMS) là bệnh thiệt hại nghiêm trọng cho tôm nuôi bao gồm cả tôm thẻ chân trắng và tôm sú dù là nuôi thâm canh hoặc bán thâm canh. Bệnh do vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus tích hợp với phage độc tương thích, tạo ra một độc tố mạnh làm phá hủy mô và làm rối loạn chức năng gan tụy trong hệ thống tiêu hóa của tôm. Đây là nguyên nhân làm tôm chết sớm trong vòng 30-35 ngày đầu tiên sau khi thả, tỷ lệ tôm chết có thể lên tới trên 70%.
Biểu hiện tôm bị gan là giai đoạn đầu tôm thường có biểu hiện mềm, lờ mờ, rỗng ruột hoặc đứt đoạn, dày dày không có thức ăn, Tôm có màu từ nhạt đến trắng, có thể bị teo gan, giảm kích thước gan > 50%, rớt đáy nhiều. Cuối giai đoạn của bệnh, các đoạn hoặc đốm đen làm lắng đọng Melanin từ hoạt động của tế bào máu xuất hiện trong gan.
Công dụng của việc chẩn đoán nhanh bệnh tôm chết sớm AHNPD/ EMS
Kiểm soát tôm giống, phát hiện sớm bệnh AHPND trên tôm giống để đưa ra pháp đồ điều trị
Sàng lọc thức ăn cho tôm bố mẹ, vì vi khuẩn Vibrio có thể tồn tại trong thức ăn thủy sản
Kiểm soát bệnh của ao nuôi, nguồn nước cần được kiểm tra, lấy mẫu nhằm chẩn đoán bệnh EMS trên tôm định kỳ, thường xuyên.
Kiểm tra tôm thành phẩm định kỳ theo từng giai đoạn trong khu vực nuôi trồng.
Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh AHPND/EMS như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, kit test nhanh,… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại các kết quả mang độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất cần kết quả thí nghiệm có độ tin cậy cao. Tuy nhiên nếu để sàng lọc nhanh cho các hộ nuôi trồng nhỏ lẻ bạn có thể tham khảo các kit test nhanh đã được thương mại tại VISITECH như:
https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/kit-test/benh-tom/
Để có thể giải quyết các vấn đề về độ đặc hiệu chúng ta có thể sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh AHPND/ EMS trên mẫu tôm.
AHPND/ EMS real-time PCR VISIKIT
AHPND/ EMS Real-time PCR VISIKIT được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện vi khuẩn gây bệnh AHPND/EMS. Bên cạnh các ưu điểm của phương pháp real-time PCR sử dụng bộ kit AHPND/ EMS Real-time PCR VISIKIT cũng đòi hỏi các phòng thử nghiệm phải trang bị các phòng thử nghiệm đạt độ an toàn và các thiết bị như máy real-time PCR, máy ly tâm, tủ âm sâu,… và đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo chuyên nghiệp.
VISITECH sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất. Chúng tôi sẽ lựa chọn cho bạn những thiết bị tốt nhất phù hợp với yêu cầu của bạn.
Phương pháp này có thể sử dụng cho các phòng thí nghiệm nhỏ, các công ty, doanh nghiệp yêu cầu kiểm nghiệm, kiểm soát sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh AHPND/EMS trong nuôi trồng tôm.
Điều kiện lưu trữ
-20oC
Tên sản phẩm
AHPND/ EMS Real-time PCR VISIKIT
Mã sản phẩm
FARA-07
Nhà sản xuất
VISITECH- VIỆT NAM
Thương hiệu
VISIKIT
Hạn sử dụng
12 tháng kể từ ngày sản xuất
Thành phần bộ kit
| Thành phần AHPND/EMS qPCR mix bao gồm: | Vừa đủ cho 50 phản ứng |
| Taq. Polymerase |
64×20µL |
| MgCl2 | |
| dNTP | |
| Mồi (Primers) | |
| Nước | |
| Chứng dương AHPND/EMS | 1×100 µL |
| Chứng âm | 1x1mL |
Hướng dẫn sử dụng
Quy trình tách chiết DNA
Quy trình tách thủ công
Sẽ được áp dụng cho các phòng kiểm nghiệm nhỏ và số lượng mẫu tương đối ít. Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,…hoặc sử dụng các bộ tách chiết như Genomic DNA Extraction ViSiKit (VS-EX-H063).
Quy trình tách tự động
Phù hợp cho các phòng kiểm nghiệm độc lập, công ty, doanh nghiệp sản xuất có số lượng mẫu lớn, yêu cầu thời gian kiểm nghiệm nhanh. Bộ Highpure viral extraction ViSiKit (EXS-021) được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA/RNA vi rút từ mẫu tôm kết hợp với các loại máy tách chiết hạt từ như: Máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) Bioer…
Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao khác,.. Để biết thêm chi tiết cho các thiết bị liên quan đến tách chiết DNA/RNA tự động bạn có thể liên hệ VISITECH qua số hotline 0919112141.
Mỗi lần tách chiết nên sử dụng 1 mẫu chứng âm là 50 µL EB Buffer để kiểm soát.
Thực hiện phản ứng PCR
- Đầu tiên bạn kiểm tra số lượng mẫu, lấy số lượng cần thiết ống AHPND/EMS qPCR mix sau đó rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15–25°C), spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.
- Bạn hãy mở nắp lần lượt và hút 5 µL mẫu cho vào các tube AHPND/EMS qPCR mix đã chuẩn bị ở trên theo thứ tự: Chứng âm, chứng âm tách chiết, DNA mẫu và cuối cùng là mẫu đối chứng dương sau đó đóng nắp tube để hạn chế việc nhiễm chéo tốt nhất.
- Mỗi lần chạy nên có ít nhất một chứng âm tách chiết,một chứng dương và một chứng âm PCR để có thể kiểm soát kết quả test.
- Sau khi bạn thực hiện các bước trên bạn hãy kiểm tra lại nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho vi khuẩn gây bệnh AHPND/EMS và kênh màu HEX cho chứng nội.
- Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:
1 chu kỳ: 95oC 3 phút 45 chu kỳ: 95oC 10 giây 60oC 40 giây (chọn đọc tín hiệu ở bước này) Phân tích kết quả
-
- Mẫu âm tính với vi khuẩn gây bệnh AHPND/EMS: chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu
- Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng qPCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại DNA.
- Mẫu dương tính với vi khuẩn gây bệnh AHPND/EMS: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.
- Bảng tóm tắt phân tích kết quả
STT AHPND/EMS (FAM) IC (HEX) Kết luận 1 – + Mẫu âm tính với AHPND/EMS 2 + -/+ Mẫu dương tính với AHPND/EMS 3 – – Không thể kết luận - Xử lý sự cố: đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của VISITECH chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục:
Sự cố Nguyên nhân Khắc phục Không xuất hiện tín hiệu nào ở tất cả các giếng, kể cả chứng dương - Cài đặt sai chương trình qPCR
- Khai báo vị trí và thông số giếng sai
- Thiết bị qPCR gặp sự cố
- Hóa chất của kit không được bảo quản theo đúng chỉ định
- Kiểm tra lại chương trình chạy qPCR
- Kiểm tra lại thông tin các giếng
- Kiểm tra lại hoạt động của thiết bị qPCR
- Kiểm tra lại điều kiện bảo quản và hạn sử dụng của kit
Chứng dương bình thường mẫu xét nghiệm không cho tín hiệu vượt ngưỡng nào, kể cả màu HEX - Hàm lượng DNA thu được quá cao
- Có chất ức chế trong mẫu
- Pha loãng 10 lần dịch DNA và thực hiện lại phản ứng PCR
- Bổ sung một lượng nhỏ chứng dương mục tiêu vào mẫu tách chiết. Nếu kết quả vẫn âm tính thì kết luận có chất ức chế trong mẫu. Tiến hành tách chiết lại hoặc xử lý như cách 1
Tín hiệu FAM, HEX vượt ngưỡng trong chứng âm, chứng âm tách chiết - Micropipet bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR
- Hóa chất PCR bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR
- Môi trường làm việc bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR
- Vệ sinh hoặc thay micropipet mới; sử dụng filter tip
- Sử dụng hóa chất PCR khác
- Yêu cầu bộ phận kỹ thuật đến vệ sinh môi trường làm việc.
Danh mục Visikit cho xét nghiệm bệnh thủy sản
YHV One-Step Real-time RT-PCR Kit
IHHNV Real-time PCR VISIKIT
WSSV Real-time PCR VISIKIT kiểm tra virus gây bệnh đốm trắng trên tôm
EHP Real-time PCR VISIKIT
AHPND/EMS Real-time PCR VISIKIT
HPV Real-time PCR VISIKIT
NHPB Real-time PCR VISIKIT
Và đầy đủ các trang thiết bị cho một phòng thử nghiệm realtime PCR đạt chuẩn như: máy realtime PCR ( Máy Real time PCR 96 giếng 5 kênh màu CFX96, Máy Real-time PCR LineGene 9600…), máy ly tâm, máy spindown, tủ âm sâu, tủ trữ mẫu, các vật tư tiêu hao.
Trên đây, Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn đầy đủ các thông tin kỹ thuật và đào tạo chuyên môn tốt nhất để bạn có thể thực hiện thử nghiệm phát hiện các mầm bệnh trong nuôi trồng thủy sản một cách chính xác và nhanh chóng nhất.
Thông tin liên hệ Visitech
Để được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc, hướng dẫn sử dụng và báo giá cụ thể, hãy liên hệ ngay với Visitech – Công ty TNHH Khoa học Kỹ thuật Việt Sinh qua các thông tin bên dưới:
Email: info@visitech.vn
Hotline: 0919112141
Zalo: 0919112141
Website: https://visitech.vn/
Map: Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh
Kênh Youtube: Visitech
Fanpage: Visitech
Địa chỉ: 730/1/2/7C Hương Lộ 2, Phường Bình Trị Đông A, Quận Bình Tân, Tp.HCM
Đánh giá
Chưa có đánh giá nào.