Canine distemper virus- CDV gây bệnh gì trên chó?

Canine distemper virus– CDV là Virus gây bệnh sài sốt ở chó thuộc giống Morbillivirus, họ Paramyxoviridae.CDV có bộ gen là một RNA chuỗi đơn âm, đường kính từ 150 – 250 nm, được bao bọc trong một nucleocapsid đối xứng dạng xoắn. Nó có một envelope lipoprotein, hợp thành glycoproteins H (protein bám dính) và F (protein hòa màng). Virus mã hóa cho các protein có khả năng hợp nhất màng tế bào và cũng có thể gây dung hợp tế bào, hình thành hợp bào.

Bệnh có thể xảy ra ở chó nhiều lứa tuổi, nhưng phổ biến nhất chó con không tiêm phòng 12 đến 16 tuần tuổi do mất kháng thể mẹ truyền hoặc không nhận đủ kháng thể mẹ truyền.

Phương thức lây truyền

Virus sài sốt ở chó lây qua khí dung và tiếp xúc với biểu bì của đường hô hấp trên. Trong vòng 24 giờ sau khi nhiễm, nó sinh sản trong đại thực bào ở mô và theo các mạch bạch huyết cục bộ đến hạch amydale và các hạch bạch huyết phế quản và gia tăng vào khoảng ngày thứ 2 – 4. Vào khoảng ngày thứ 4 – 6, virus sinh sản bên trong các nang lympho trong lách, lamina propia của dạ dày và ruột non, các hạch bạch huyết màng treo ruột, và các tế bào Kupffer trong gan. Theo máu, virus lây lan đến các biểu mô và mô thần kinh trung ương vào ngày thứ 8 – 9. Từ ngày thứ 9 – 14, virus lây lan đến nhiều mô như da, các tuyến ngoại tiết và nội tiết, biểu mô dạ dày ruột, hô hấp và niệu dục.

Virus có thể đi vào nhu mô não và tích tụ khoang quanh mạch. Ngoài ra, virus đi vào các đám rối màng mạch màng mạch của não thất thứ tư và nhân lên trong các tế bào biểu mô đám rối màng mạch. Trong tế bào ống nội tủy, virus đi vào các tế bào thần kinh đệm hình sao, nhân lên và lây đến các tế bào liền kề, các tế bào thần kinh đệm ít nhánh và neuron. Sự nhiễm virus trong tế bào thần kinh đệm ít nhánh dẫn đến thoái hóa myelin nguyên phát.

Triệu chứng lâm sàng

Chó được gây nhiễm có các biểu hiện lâm sàng như sốt, có dịch mắt dịch mũi, ho, khó thở, giảm ăn, tiêu chảy, nôn mửa, xuất hiện nốt sài dưới da, ngoài ra cũng liên quan đến thần kinh…

Phương pháp phát hiện CDV 

Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi rút gây bệnh trên thú y  như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, quan sát máu dưới kính hiển vi, kit test nhanh [*],… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại kết quả có độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất cần kết quả thử nghiệm có độ tin cậy, chính xác cao. 

Vì vậy, việc sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của tổ hợp nhiều loại vi rút gây bệnh  trên thú y chỉ thông qua một thí nghiệm sẽ giúp cải thiện được thời gian, độ nhạy và độ đặc hiệu cao.  

CDV realtime PCR Visikit

Sản phẩm CDV realtime PCR Visikit được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện vi rút gây bệnh.  Đối với phương pháp real-time PCR sử dụng bộ kit CDV realtime PCR Visikit yêu cầu phải trang bị một số thiết bị phục vụ cho việc phát hiện mầm bệnh như máy real-time PCR, máy ly tâm, tủ bảo quản và một số vật tư tiêu hao thông thường,…cùng đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo về chuyên môn cũng như kỹ năng.

Visitech sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất. Chúng tôi sẽ lựa chọn cho bạn một giải pháp tốt nhất phù hợp với yêu cầu của bạn. 

Điều kiện lưu trữ

-20⁰C

Tên sản phẩm

CDV realtime PCR Visikit

Mã sản phẩm

ANIFR-02

Nhà sản xuất

Visitech- Việt Nam

Hạn sử dụng 

12 tháng kể từ ngày sản xuất

Thành phần bộ kit

Hướng dẫn sử dụng

Chuẩn bị mẫu

Mẫu máu toàn phần: máu được thu trong ống chuyên dụng chứa chất chống đông máu (không sử dụng ống chứa heparin vì sẽ gây ức chế phản ứng).

Huyết thanh: Lấy 3 mL máu cho vào tube (không chứa chất chống đông EDTA và heparin). Sau đó, tiến hành phân tách huyết thanh bằng cách ly tâm ở 3000 rpm trong 15 phút. Huyết thanh sau đó được chuyển vào tube polypropylene vô trùng.

Quy trình tách chiết DNA 

• Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA/RNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,… Tuy nhiên các phương pháp này sẽ không đảm bảo chát lượng vật liệu di truyền trong mẫu bệnh phẩm; việc tồn dư các hóa chất trong mẫu có thể gây ức chế phản ứng PCR.  

• Ngoài ra nếu số lượng mẫu nhiều, khuyến cáo sử dụng máy tách chiết tự động[*] đi kèm với hóa chất sử dụng cho máy Genomic DNA Extraction Visikit [*]

• Nếu số lượng mẫu ít khuyến cáo sử dụng bộ  tách chiết bằng tay theo phương pháp cột Silica: Bộ kit Blood DNA Extraction Visikit [*] sử dụng cho tách chiết DNA virus từ mẫu máu toàn phần; 

Thực hiện phản ứng PCR

✓ Lấy số lượng cần thiết ống CDV RT- rPCR mix. Rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15– 25°C), sau đó spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.

✓ Hút 5 μL RNA mẫu, chứng âm tách chiết, chứng dương cho vào các tube CDV RT- rPCR mix đã chuẩn bị ở trên.

Chú ý:

– Mỗi lần chạy nên có ít nhất 1 chứng âm tách chiết, 1 chứng dương và 1 chứng âm PCR.

– Chuẩn bị phản ứng theo thứ tự sau: Chứng âm, chứng âm tách chiết, mẫu và chứng dương.

✓ Đóng nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho CDV và kênh màu HEX cho chứng nội.

✓ Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:

Phân tích kết quả

• Mẫu âm tính với CDV: chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu
•  Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng real-time PCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại DNA.
• Mẫu dương tính với CDV: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.

Bảng tóm tắt phân tích kết quả

Xử lý sự cố

Đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của Visitech chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục

Visitech – Nhà sản xuất Kit PCR chất lượng cao

Ngoài việc phát hiện CDV trên chó, Visitech chúng tôi còn cung cấp thêm các kit qPCR phát hiện các loài virus, vi khuẩn gây bệnh trên thú y theo link danh mục sau: 

https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/kit-test/kit-pcr/

Khi truy cập vào link này, chúng ta sẽ thấy thêm rất nhiều loại Kit cũng thường xuyên được sử dụng. Ví dụ như: Kit qPCR JEV [*] để phát hiện bệnh trong nhóm thú y. Hay Kit ASFV gây bệnh trên heo [*] hay Kit qPCR FMDV [*] để phát hiện FMDV gây bệnh cho động vật ở nhóm thú y và còn rất nhiều Kit khác…

Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện bệnh, Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Mời Qúy khách hàng tham khảo Link bên dưới: https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/sinh-hoc-phan-tu/ 

Tại sao nên chọn Visikit

Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử là một trong những thế mạnh của chúng tôi. 

Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485 năm 2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý an toàn cho sản phẩm.

Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R & D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng. 

Đặc biệt, công ty chúng tôi có hàng DEMO để chạy thử nghiệm nhằm chứng minh chất lượng đối với những khách hàng có nhu cầu. Kỹ sư chúng tôi sẽ trực tiếp hướng dẫn và training cho tới khi thành thạo.

Thông tin liên hệ Visitech 

Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit PCR phát hiện CDV của Visitech mà chúng tôi biên soạn. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích. 

Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới:

• Email: info@visitech.vn
• Hotline: 0919112141
• Zalo: 0919112141
• Website: https://visitech.vn/
• Map: Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh 
• Kênh Youtube: Visitech
• Fanpage: Visitech
• Địa chỉ: 730/1/2/7C Hương Lộ 2, Phường Bình Trị Đông A, Quận Bình Tân, Tp.HCM