NHPB real-time PCR Visikit FARA-09

Bệnh đốm đen NHPB trên tôm là gì?

Bệnh đốm đen hay còn gọi là bệnh hoại tử gan tụy có nguyên nhân từ vi khuẩn NHPB (Necrotizing hepatopancreatitis bacterium), đây là một loại vi khuẩn nội bào, nhân giống dòng vi khuẩn này phải bằng phương pháp in vivo thông qua việc lây truyền từ tôm nhiễm NHPB sang các cá thể khỏe mạnh. Bệnh hoại tử gan tụy do vi khuẩn gây ra hoàn toàn khác với bệnh hoại tử gan tụy cấp tính EMS/AHPND mà ta đã biết. 

Chẩn đoán Bệnh hoại tử gan tụy do vi khuẩn (NHPB) hay bệnh đốm đen : Bệnh xảy ra do các điều kiện môi trường ao nuôi kém, đặc biệt là đáy ao bị dơ, các ao nuôi xuất hiện bệnh “đốm đen” thường có hàm lượng các khí độc như NH3, NO2 rất cao. 

Tỷ lệ chết có thể lên đến 95% trong vòng 15 – 30 ngày kể từ khi phát hiện bệnh nếu không có bất kỳ biện pháp chữa trị nào được áp dụng ngay tức thời đối với  trường hợp ao nuôi ô nhiễm nặng và hàm lượng vi khuẩn trong nước ao nuôi vượt ngưỡng gấp nhiều lần. 

Tôm bệnh có các biểu hiện như lờ đờ, giảm ăn hoặc bỏ ăn, tốc độ tăng trưởng chậm, trên thân xuất hiện nhiều đốm đen li ti hoặc mảng lớn màu đen, mang màu tối hoặc đen, đuôi mỏng, có thể có những tổn thương phụ bộ như mòn đuôi và vảy râu, cụt râu, … Đối với những trường hợp bệnh nặng ruột rỗng, gan tụy nhợt nhạt, bề mặt thân tôm bị đốm đen có thể có mùi hôi.

Với mức độ phổ biến cao, phân bố rộng và khả năng gây thiệt hại kinh tế đáng kể trong ngành nuôi tôm, vì vậy việc nghiên cứu và phát hiện kịp thời vi khuẩn NHPB là rất quan trọng. Đặc biệt trong thời điểm chưa có thuốc đặc hiệu điều trị và nuôi cấy dòng vi khuẩn này rất khó khăn thì việc sàng lọc phát hiện sớm bệnh sẽ giảm thiểu được tối đa thiệt hại kinh tế. 

Vì sao cần phát hiện sớm tôm mắc bệnh đốm đen?

Kiểm soát tôm giống

Sàng lọc thức ăn cho tôm bố mẹ

Kiểm soát bệnh của ao nuôi

Kiểm tra các mẫu môi trường trong khu vực nuôi trồng

Bộ kit real-time PCR phát hiện tôm bị vi khuẩn NHPB

Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh NHPB như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, kit test nhanh,… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại các kết quả mang độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất cần kết quả thí nghiệm có độ tin cậy cao. 

Để có thể giải quyết các vấn đề về độ đặc hiệu chúng ta có thể sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh  NHPB  trên mẫu tôm.  Sản phẩm NHPB  Real-time PCR Visikit  được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện vi khuẩn gây bệnh  NHPB.  Bên cạnh các ưu điểm của phương pháp real-time PCR sử dụng bộ kit NHPB  Real-time PCR Visikit  cũng đòi hỏi các phòng thử nghiệm phải trang bị các phòng thử nghiệm đạt độ an toàn và các thiết bị như máy real-time PCR, máy ly tâm, tủ âm sâu,… và đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo chuyên nghiệp. 

VISITECH sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất. Chúng tôi sẽ lựa chọn cho bạn những thiết bị tốt nhất phù hợp với yêu cầu của bạn. 

Phương pháp này có thể sử dụng cho các phòng thí nghiệm nhỏ, các công ty, doanh nghiệp yêu cầu kiểm nghiệm, kiểm soát sự hiện diện của vi vi khuẩn NHPB trong nuôi trồng tôm. 

Điều kiện lưu trữ

 -20⁰C

Tên sản phẩm

NHPB  Real-time PCR Visikit

Mã sản phẩm

FARA-09

Nhà sản xuất

Visitech – Việt Nam

Hạn sử dụng

12 tháng kể từ ngày sản xuất

Thành phần bộ kit

Hướng dẫn sử dụng bộ kit Real time PCR xác định bệnh đốm đen NHPB trên tôm

Quy trình tách chiết DNA/ RNA

Quy trình tách thủ công 

Thường được áp dụng cho các phòng kiểm nghiệm nhỏ và số lượng mẫu tương đối ít. Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,…hoặc sử dụng các bộ tách chiết cột silica từ mẫu tôm như  Highpure Viral Extraction Visikit (HEKA-01).

Quy trình tách tự động

Phù hợp cho các phòng kiểm nghiệm độc lập, công ty, doanh nghiệp sản xuất có số lượng mẫu lớn, yêu cầu thời gian kiểm nghiệm nhanh. Bộ Maga Genomic DNA/RNA Extraction VISIKIT (MGEKA-32.R.B) được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA/RNA vi rút từ mẫu tôm kết hợp với các loại máy tách chiết hạt từ như: Máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) Bioer,… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao khác. 

Visitech hiện đang cung cấp các loại hóa chất tự động trên đa dạng nhiều loại máy khác nhau như máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) [**] của hãng Bioer, máy tách chiết tự động của hãng Thermo Kingfisher, máy tách chiết tự động của hãng TANbead… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao dành riêng cho từng máy. Để biết thêm chi tiết cho các thiết bị liên quan đến tách chiết DNA/RNA tự động các bạn có thể liên hệ Visitech qua số hotline hoặc email [**]

Thực hiện phản ứng PCR

• • Đầu tiên bạn kiểm tra số lượng mẫu, lấy số lượng cần thiết ống NHPB qPCR mix sau đó rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15–25°C), spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.
  • Bạn hãy mở nắp lần lượt và hút 5 µL mẫu cho vào các tube NHPB qPCR mix đã chuẩn bị ở trên  theo thứ tự: Chứng âm, chứng âm tách chiết, DNA mẫu và cuối cùng là mẫu  đối chứng dương  sau đó đóng nắp tube để hạn chế việc nhiễm chéo tốt nhất.
  • Mỗi lần chạy nên có ít nhất một chứng âm tách chiết,một  chứng dương và một chứng âm PCR để có thể kiểm soát kết quả test.
  • Sau khi bạn thực hiện các bước trên bạn hãy kiểm tra lại nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho vi khuẩn gây bệnh NHPB và kênh màu HEX cho chứng nội.
• Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:

Phân tích kết quả

• • Mẫu âm tính với vi khuẩn NHPB: chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu
  • Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng qPCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại DNA.
  • Mẫu dương tính với vi khuẩn NHPB: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong một số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.

Bảng tóm tắt phân tích kết quả

Xử lý sự cố

Đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của Visitech chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục:

Danh mục Visikit cho xác định bệnh trong mẫu thủy sản

Bên cạnh đó Visitech còn cung cấp thêm các kit thử nghiệm định danh một số loài vi khuẩn, vi rút gây bệnh khác trong nuôi trồng thủy hải sản bạn có thể tham khảo tại Danh mục các kit test bệnh thủy sản bằng phương pháp real-time PCR   

Bên cạnh bộ kít phát hiện bệnh đốm đen chúng tôi còn cung cấp một số bộ kit phát hiện các bệnh khác như bệnh đốm trắng, hội chứng gan tụy cấp tính , bệnh hoại tử cơ quan tạo máu và cơ quan lập biểu mô,.. 

Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện định danh loài Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn thiết kế tối ưu một phòng thí nghiệm đạt chuẩn với chất lượng và giá cả cạnh tranh nhất. Mời Qúy khách hàng tham khảo trong Danh mục sản phẩm liên quan lĩnh vực sinh học phân tử 

Tại sao nên chọn Visikit

Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử hiện nay đang là mũi nhọn phát triển của chúng tôi. 

Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485:2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý chất lượng cho sản phẩm đảm bảo sản phẩm đến tay bạn là luôn có chất lượng đảm bảo nhất.

Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R&D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng. 

Đặc biệt chúng tôi luôn hỗ trợ các khách hàng mới thử nghiệm các sản phẩm của chúng tôi trước khi bạn quyết định mua và sử dụng các sản phẩm của chúng tôi cho doanh nghiệp của mình. Bằng cách này bạn sẽ có cách nhìn trực quan nhất, có thể so sánh với các dòng sản phẩm khác mà bạn đang sử dụng hoặc phân vân lựa chọn. Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn về kỹ thuật một cách tốt nhất, chia sẻ cùng bạn các khó khăn khi thực hiện các thao tác thí nghiệm để bạn có kết quả kiểm tra chính xác và kịp thời nhất. 

Thông tin liên hệ Visitech 

Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit real time PCR phát hiện bệnh đốm đen NHPB trên tôm do Visitech nghiên cứu và sản xuất. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích. 

Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn, định danh trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới:

• Email: info@visitech.vn
• Hotline: 0919112141
• Zalo: 0919112141
• Website: https://visitech.vn/
• Map: Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh 
• Kênh Youtube: Visitech
• Fanpage: Visitech