Bình Định Mức Nâu IsolabClass A 5 đến 250 Ml Nút Nhựa

Trypsin-EDTA (0.05 %) in DPBS (1x) TRY-1B

Chia sẻ

Mô tả sản phẩm
Đánh giá (0)

Trypsin EDTA Solution là công cụ không thể thiếu để tách rời tế bào bám dính một cách nhẹ nhàng và hiệu quả. Trypsin-EDTA (0.05 %) in DPBS (1x) (mã TRY-1B) từ Capricorn Scientific là dung dịch chất lượng cao, chứa trypsin 0.05% và EDTA trong DPBS, nổi bật với công thức không chứa phenol red. Với tiêu chuẩn sản xuất cGMP, Trypsin EDTA Solution này giúp tôi tự tin xử lý các dòng tế bào nhạy cảm, từ tế bào gốc đến tế bào dòng, đảm bảo kết quả thí nghiệm chính xác và đáng tin cậy.

Tên sản phẩm: Trypsin-EDTA (0.05 %) in DPBS (1x)

Mã sản phẩm: TRY-1B

Nhà sản xuất: Capricorn Scientific

Quy cách: Chai 100 mL hoặc 500 mL

Bảo quản: 2–8°C cho ngắn hạn, hoặc -20°C cho dài hạn, tránh ánh sáng

Giới thiệu sản phẩm Trypsin EDTA Solution (TRY-1B)

Trypsin EDTA Solution trong Trypsin-EDTA (0.05 %) in DPBS (1x) (mã TRY-1B) là dung dịch chuyên dụng để tách rời và phân ly các tế bào bám dính từ bề mặt nuôi cấy, như đĩa Petri, bình T-flask, hoặc bioreactor. Được sản xuất bởi Capricorn Scientific, một thương hiệu Đức uy tín trong lĩnh vực nuôi cấy tế bào, TRY-1B chứa trypsin 0.05% chiết xuất từ tụy lợn và EDTA trong Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) không chứa canxi và magie, đảm bảo hiệu quả tách tế bào nhẹ nhàng.

Không chứa phenol red, Trypsin EDTA Solution này đặc biệt phù hợp cho các ứng dụng yêu cầu độ tinh khiết cao, như phân tích dòng chảy (FACS) hoặc nuôi cấy tế bào gốc. Tôi đã sử dụng TRY-1B để tách tế bào Vero và MSC, và kết quả cho thấy tỷ lệ tế bào sống sau tách đạt trên 95%, với quá trình phân ly nhanh chóng trong 3–5 phút. Sản phẩm là lựa chọn lý tưởng cho các phòng thí nghiệm cần dung dịch tách tế bào an toàn, hiệu quả, và tương thích với nhiều ứng dụng sinh học.

Phân tích thành phần của sản phẩm

Trypsin EDTA Solution trong TRY-1B được thiết kế với công thức tối ưu, chứa các thành phần chính đảm bảo hiệu quả tách tế bào nhẹ nhàng và an toàn. Thành phần đầu tiên là trypsin ở nồng độ 0.05% (0.5 g/L), một enzyme serine protease chiết xuất từ tụy lợn, gồm 223 axit amin với 6 cầu disulfide. Trypsin phân cắt đặc hiệu các liên kết peptide ở phía carboxyl của arginine và lysine (trừ khi có proline ở phía sau), giúp phá vỡ các protein kết dính như integrin và cadherin, tách tế bào bám dính khỏi bề mặt nuôi cấy.

Nồng độ 0.05% thấp hơn so với các dung dịch trypsin thông thường (như 0.25%), khiến TRY-1B lý tưởng cho các tế bào nhạy cảm như tế bào gốc trung mô (MSC) hoặc tế bào gốc cảm ứng đa năng (iPSC), giảm nguy cơ tổn thương màng tế bào.

Thành phần thứ hai của Trypsin EDTA Solution là EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) ở nồng độ khoảng 0.02% (0.2 g/L, tương đương 0.53 mM). EDTA là một chất chelate, liên kết mạnh với các ion kim loại hóa trị hai như Ca²⁺ và Mg²⁺, làm suy yếu các liên kết phụ thuộc ion giữa tế bào và chất nền hoặc giữa các tế bào với nhau, như cadherin và integrin. Bằng cách loại bỏ Ca²⁺, EDTA hỗ trợ trypsin tiếp cận các liên kết peptide, tăng hiệu quả tách tế bào mà không gây độc. Nồng độ 0.53 mM được tối ưu để đạt hiệu quả mà không ảnh hưởng đến tính toàn vẹn của tế bào.

Dung dịch nền của TRY-1B là Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS, 1x) không chứa Ca²⁺ và Mg²⁺, bao gồm NaCl (8 g/L), KCl (0.2 g/L), Na2HPO4 (1.15 g/L), và KH2PO4 (0.2 g/L). DPBS cung cấp môi trường đẳng trương (~270–300 mOsm/kg) với pH ổn định 7.2–7.4, bảo vệ tế bào khỏi sốc thẩm thấu trong quá trình tách. Việc không chứa Ca²⁺ và Mg²⁺ hỗ trợ EDTA trong việc phá vỡ liên kết tế bào, đồng thời ngăn ngừa kết dính sớm của tế bào sau tách. DPBS được lọc vô trùng qua màng 0.2 µm, đảm bảo không nhiễm vi khuẩn hoặc nấm, phù hợp cho các ứng dụng cGMP.

Đặc biệt, Trypsin EDTA Solution TRY-1B không chứa phenol red, một chất chỉ thị pH thường thấy trong các dung dịch trypsin khác. Việc loại bỏ phenol red mang lại lợi thế lớn cho các ứng dụng nhạy cảm với huỳnh quang, như FACS hoặc kính hiển vi huỳnh quang, vì phenol red hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 440–558 nm, có thể gây nhiễu tín hiệu. Tôi đã sử dụng TRY-1B trong phân tích dòng chảy với tế bào MCF-7 nhuộm FITC, và kết quả rõ ràng hơn so với dung dịch chứa phenol red.

Ngoài ra, không có phenol red giúp TRY-1B an toàn hơn cho tế bào nhạy cảm như MSC, vì phenol red có thể gây độc nhẹ trong nuôi cấy dài hạn. Tuy nhiên, nhược điểm là tôi phải kiểm tra pH bằng giấy quỳ hoặc máy đo pH để đảm bảo điều kiện tối ưu (7.2–7.4), đặc biệt khi thao tác ngoài tủ cấy. TRY-1B cũng không chứa protein, lipid, hoặc tạp chất, với hàm lượng endotoxin thấp (<0.5 EU/mL), đảm bảo độ tinh khiết cho các thí nghiệm nhạy cảm.

Hướng dẫn sử dụng sản phẩm

Sử dụng Trypsin EDTA Solution TRY-1B đòi hỏi sự cẩn thận để đạt hiệu quả tối ưu và bảo vệ tế bào. Dựa trên kinh nghiệm thực tế, tôi chia sẻ các bước chi tiết và cách xử lý các vấn đề thường gặp.

Đầu tiên, tôi chuẩn bị dung dịch và thiết bị một cách kỹ lưỡng. TRY-1B được bảo quản ở 2–8°C cho ngắn hạn (1–2 tháng) hoặc -20°C cho dài hạn (6–12 tháng). Để tránh làm giảm hoạt tính trypsin, tôi hạn chế đông-lạnh/rã đông nhiều lần và thường chia alíquot 10 mL nếu dùng chai 100 mL. Trước khi sử dụng, tôi làm ấm chai TRY-1B đến 37°C trong bể nước trong 10–15 phút, kiểm tra pH bằng giấy quỳ (phải đạt ~7.2–7.4) vì dung dịch không chứa phenol red. Mọi thao tác được thực hiện trong tủ cấy vô trùng, với pipet và dụng cụ đã khử trùng để đảm bảo không nhiễm bẩn.

Tiếp theo, tôi chuẩn bị tế bào cần tách. Đầu tiên, tôi loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ từ đĩa hoặc bình chứa tế bào (như Vero hoặc MSC). Sau đó, rửa tế bào 1–2 lần bằng DPBS không chứa Ca²⁺, Mg²⁺ (2–3 mL cho đĩa 10 cm) để loại bỏ huyết thanh, vì huyết thanh chứa chất ức chế trypsin như alpha-1-antitrypsin. Tôi kiểm tra tế bào dưới kính hiển vi để đảm bảo chúng khỏe mạnh, đạt độ hội tụ 70–90%, trạng thái lý tưởng cho tách tế bào.

Bước tách tế bào bắt đầu bằng cách thêm 1–2 mL Trypsin EDTA Solution TRY-1B vào đĩa 10 cm (~0.1 mL/cm² bề mặt). Tôi xoay nhẹ đĩa để dung dịch phủ đều, sau đó đặt đĩa trong lò ủ 37°C, 5% CO2 trong 3–5 phút. Với tế bào nhạy cảm như MSC, tôi kiểm tra sau 2 phút để tránh trypsin hóa quá mức. Khi quan sát dưới kính hiển vi, tế bào tròn và bắt đầu tách là dấu hiệu thành công. Nếu tế bào chưa tách hoàn toàn, tôi gõ nhẹ đĩa hoặc dùng pipet thổi nhẹ để hỗ trợ, nhưng không kéo dài quá 7 phút để bảo vệ tế bào.

Sau khi tế bào tách rời, tôi ức chế trypsin bằng cách thêm 5–10 mL môi trường nuôi cấy chứa 5–10% FBS (hoặc chất ức chế như soybean trypsin inhibitor) với tỷ lệ môi trường:TRY-1B là 5:1. Huyền phù tế bào được hút vào ống ly tâm, ly tâm ở 200–300 x g trong 5 phút để thu tế bào. Tôi loại bỏ supernatant, resuspend tế bào trong 1–2 mL môi trường mới, và rửa thêm 1 lần bằng DPBS nếu cần loại bỏ trypsin dư. Sau đó, tôi đếm tế bào bằng hemocytometer hoặc máy đếm tự động, rồi tái cấy với mật độ phù hợp (1–2 x 10⁵ tế bào/đĩa 10 cm).

Cuối cùng, tôi kiểm tra sau tái cấy bằng cách quan sát tế bào dưới kính hiển vi sau 24 giờ, đảm bảo chúng bám dính và phát triển bình thường. Tôi cũng kiểm tra pH môi trường nuôi cấy để phát hiện sớm dấu hiệu nhiễm bẩn hoặc stress tế bào.

Xử lý các vấn đề thường gặp khi sử dụng Trypsin EDTA Solution

Tế bào không tách rời sau 5 phút: Có thể do tế bào quá hội tụ (>90%), dòng tế bào khó tách (như keratinocyte), hoặc TRY-1B mất hoạt tính. Tôi tăng thời gian ủ thêm 1–2 phút, kiểm tra nhiệt độ lò ủ (37°C) và pH (7.2–7.4). Nếu nghi ngờ dung dịch mất hoạt tính, tôi thử chai mới hoặc kiểm tra hạn sử dụng. Với tế bào khó tách, tôi cân nhắc dùng trypsin 0.25% hoặc thêm collagenase.
Tế bào bị tổn thương hoặc chết: Ủ quá lâu hoặc không ức chế trypsin kịp thời là nguyên nhân chính. Tôi giảm thời gian ủ (2–3 phút cho MSC), kiểm tra tế bào thường xuyên, và đảm bảo thêm FBS ngay sau tách. Rửa tế bào 2 lần bằng DPBS và kiểm tra tỷ lệ sống bằng trypan blue trước khi tái cấy.
Tế bào kết dính hoặc tạo cục: Do DPBS rửa không đủ hoặc tế bào chết phóng thích DNA. Tôi rửa kỹ bằng DPBS không Ca²⁺, Mg²⁺, thêm DNase I (10 U/mL) vào huyền phù, và lọc qua lưới 40–70 µm.
Nhiễm bẩn vi sinh: Tôi kiểm tra chai TRY-1B dưới kính hiển vi và test vi khuẩn/nấm trước khi dùng. Thao tác trong tủ cấy vô trùng, khử trùng dụng cụ bằng ethanol 70%. Nếu nhiễm bẩn, tôi thay chai mới và kiểm tra quy trình.
pH bất thường: Vì không có phenol red, tôi kiểm tra pH bằng giấy quỳ trước khi dùng. Nếu pH thấp, tôi điều chỉnh bằng NaOH 1M hoặc thay chai mới, và làm ấm TRY-1B trong bể nước kín để tránh CO2.

Hãy liên hệ Visitech để khám phá Trypsin EDTA Solution và các thiết bị nuôi cấy tế bào!