Kit multiplex real time PCR phát hiện virus MrNV XSV trên tôm

MrNV | XSV real-time PCR Visikit FARA-21

Mô tả
Đánh giá (0)

MrNV và XSV là bệnh gì?

Macrobrachium rosenbergii (MrNV) được biết đến như một mầm bệnh chính gây bệnh trắng đuôi ở tôm, với tỷ lệ chết lên đến 100% trong vòng 6 ngày sau khi xuất hiện các dấu hiệu đầu tiên của bệnh, bao gồm cả phân trắng hoặc cơ bụng màu trắng đục. MrNV thuộc họ Nodaviridae với bộ gen là RNA.

Bệnh đuôi trắng, hoặc bệnh cơ trắng do các điểm do vi rút gây ra trên thân tôm, có thể lây nhiễm sang ấu trùng, hậu ấu trùng và giai đoạn đầu của con non, tỷ lệ tử vong .

Tuy nhiên, việc lây truyền của MrNV không gây chết ở tôm trưởng thành nhưng hiện tại chưa có các điều trị đặc hiệu với căn bệnh này. Vì vậy sàng lọc phát hiện sớm vi rút MrNV là rất quan trọng góp phần giảm thiểu mức thiệt hại xuống thấp nhất.

Bệnh trắng đuôi hay bệnh trắng cơ thịt được định nghĩa là bệnh do virus, do Macrobrachium rosenbergii nodavirus (MrNV) và có liên quan đến virus siêu nhỏ (extra small virus – XSV). Chúng gây ra dạng trắng sữa trong ấu trùng (larvae)/sau ấu trùng (post larvae)/thiếu trùng (juvenile) giai đoạn đầu, và gây ra các tỷ lệ tử vong lớn trong tôm càng (prawn) nước ngọt M. rosenbergii.

XSV giới hạn ở mô mang, cơ đầu, tim, cơ bụng, buồng trứng, các chân bơi (pleopod) và cơ đuôi, nhưng không nhiễm vào gay tụy hay eyestalk. Sự hiện diện của cả hai virus trong mô buồng trứng cho thấy khả năng truyền lây dọc của bệnh từ tôm giống sang ấu trùng và sau ấu trùng.

Tỷ lệ tử vong có thể đạt đến tối đa trong khoảng 5 hay 6 ngày sau khi xuất hiện các dấu hiệu bệnh đầu tiên. Rất ít sau ấu trùng sống sót được với bệnh sau 15 ngày trong một ổ dịch, và sau ấu trùng sống sót được có thể phát triển đến kích thước thương mại giống như mọi sau ấu trùng bình thường khác

Công dụng của công cụ chẩn đoán nhanh bệnh tôm MrNV và XSV

Kiểm soát tôm giống, phát hiện sớm bệnh MrNV và XSV trên tôm giống để đưa ra pháp đồ điều trị

Sàng lọc thức ăn cho tôm bố mẹ

Kiểm soát bệnh của ao nuôi, nguồn nước cần được kiểm tra, lấy mẫu nhằm chẩn đoán bệnh trên tôm định kỳ, thường xuyên.

Kiểm tra tôm thành phẩm định kỳ theo từng giai đoạn trong khu vực nuôi trồng.

Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh MrNV và XSV như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, kit test nhanh,… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại các kết quả mang độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất cần kết quả thí nghiệm có độ tin cậy cao.

MrNV/ XSV Real-time PCR Visikit

Để có thể giải quyết các vấn đề về độ đặc hiệu chúng ta có thể sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh MrNV và XSV trên mẫu tôm. MrNV/ XSV Real-time PCR VISIKIT được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện vi khuẩn gây bệnh MrNV và XSV. Bên cạnh các ưu điểm của phương pháp real-time PCR sử dụng bộ kit MrNV/ XSV Real-time PCR VISIKIT cũng đòi hỏi các phòng thử nghiệm phải trang bị các phòng thử nghiệm đạt độ an toàn và các thiết bị như máy real-time PCR, máy ly tâm, tủ âm sâu,… và đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo chuyên nghiệp.

Visitech sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất. Chúng tôi sẽ lựa chọn cho bạn những thiết bị tốt nhất phù hợp với yêu cầu của bạn.

Phương pháp này có thể sử dụng cho các phòng thí nghiệm nhỏ, các công ty, doanh nghiệp yêu cầu kiểm nghiệm, kiểm soát sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh MrNV và XSV trong nuôi trồng tôm.

Điều kiện lưu trữ

-20⁰C

Tên sản phẩm

MrNV/ XSV Real-time PCR Visikit

Mã sản phẩm

FARA-21

Nhà sản xuất

Visitech – Việt Nam

Hạn sử dụng

12 tháng kể từ ngày sản xuất

Thành phần bộ kit

Thành phần	Quy cách
Thành phần	50 test
MX qPCR mix bao gồm: Taq. Polymerase Probe MgCl2 dNTP Mồi (Primers) Nước	64×20µL
Chứng dương MX	1×100 µL
Chứng âm	1x1mL

Hướng dẫn sử dụng bộ kit Real time PCR xác định bệnh MrNV/ XSV trên tôm

Quy trình tách chiết DNA/ RNA

Quy trình tách thủ công

Thường được áp dụng cho các phòng kiểm nghiệm nhỏ và số lượng mẫu tương đối ít. Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,…hoặc sử dụng các bộ tách chiết cột silica từ mẫu tôm như Highpure Viral Extraction Visikit (HEKA-01).

Quy trình tách tự động

Phù hợp cho các phòng kiểm nghiệm độc lập, công ty, doanh nghiệp sản xuất có số lượng mẫu lớn, yêu cầu thời gian kiểm nghiệm nhanh. Bộ Maga Genomic DNA/RNA Extraction VISIKIT (MGEKA-32.R.B) được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA/RNA vi rút từ mẫu tôm kết hợp với các loại máy tách chiết hạt từ như: Máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) Bioer,… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao khác.

Visitech hiện đang cung cấp các loại hóa chất tự động trên đa dạng nhiều loại máy khác nhau như máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) [**] của hãng Bioer, máy tách chiết tự động của hãng Thermo Kingfisher, máy tách chiết tự động của hãng TANbead… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao dành riêng cho từng máy. Để biết thêm chi tiết cho các thiết bị liên quan đến tách chiết DNA/RNA tự động các bạn có thể liên hệ Visitech qua số hotline hoặc email [**]

Thực hiện phản ứng PCR

Đầu tiên bạn kiểm tra số lượng mẫu, lấy số lượng cần thiết ống MX qPCR mix sau đó rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15–25°C), spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.
Bạn hãy mở nắp lần lượt và hút 5 µL mẫu cho vào các tube MX qPCR mix đã chuẩn bị ở trên theo thứ tự: Chứng âm, chứng âm tách chiết, DNA mẫu và cuối cùng là mẫu đối chứng dương sau đó đóng nắp tube để hạn chế việc nhiễm chéo tốt nhất.
Mỗi lần chạy nên có ít nhất một chứng âm tách chiết,một chứng dương và một chứng âm PCR để có thể kiểm soát kết quả test.
Sau khi bạn thực hiện các bước trên bạn hãy kiểm tra lại nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho MrNV, màu Cy5 cho XSV và kênh màu HEX cho chứng nội
Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:

1 chu kỳ	45^oC	15 phút
1 chu kỳ	95^oC	3 phút
45 chu kỳ	95^oC	10 giây
45 chu kỳ	60^oC	30 giây (chọn đọc tín hiệu ở bước này)

Phân tích kết quả

Mẫu âm tính với MrNV và XSV: chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu.
Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng qPCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại DNA.
Mẫu dương tính với MrNV: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.
Mẫu dương tính với XSV: đường biểu diễn huỳnh quang Cy5, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.

Bảng tóm tắt phân tích kết quả

STT	XSV (CY5)	MrNV (FAM)	IC (HEX)	Kết luận
1	–	–	+	Mẫu âm tính với MrNV và XSV
2	–	+	-/+	Mẫu dương tính với MrNV
3	+	–	-/+	Mẫu dương tính với XSV
4	+	+	-/+	Mẫu dương tính với MrNV và XSV
5	–	–	–	Không xác định

Xử lý sự cố

Đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của Visitech chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục:

Sự cố	Nguyên nhân	Khắc phục
Không xuất hiện tín hiệu nào ở tất cả các giếng, kể cả chứng dương	Cài đặt sai chương trình qPCR Khai báo vị trí và thông số giếng sai Thiết bị qPCR gặp sự cố Hóa chất của kit không được bảo quản theo đúng chỉ định	Kiểm tra lại chương trình chạy qPCR Kiểm tra lại thông tin các giếng Kiểm tra lại hoạt động của thiết bị qPCR Kiểm tra lại điều kiện bảo quản và hạn sử dụng của kit
Chứng dương bình thường mẫu xét nghiệm không cho tín hiệu vượt ngưỡng nào, kể cả màu HEX	Hàm lượng DNA thu được quá cao Có chất ức chế trong mẫu	Pha loãng 10 lần dịch DNA và thực hiện lại phản ứng PCR Bổ sung một lượng nhỏ chứng dương mục tiêu vào mẫu tách chiết. Nếu kết quả vẫn âm tính thì kết luận có chất ức chế trong mẫu. Tiến hành tách chiết lại hoặc xử lý như cách 1
Tín hiệu CY5, ROX, HEX vượt ngưỡng trong chứng âm, chứng âm tách chiết	Micropipet bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR Hóa chất PCR bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR Môi trường làm việc bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR	Vệ sinh hoặc thay micropipet mới; sử dụng filter tip Sử dụng hóa chất PCR khác Yêu cầu bộ phận kỹ thuật đến vệ sinh môi trường làm việc.

Danh mục Visikit cho xác định bệnh trong mẫu thủy sản

Bên cạnh đó Visitech còn cung cấp thêm các kit thử nghiệm định danh một số loài vi khuẩn, vi rút gây bệnh khác trong nuôi trồng thủy hải sản bạn có thể tham khảo tại Danh mục các kit test bệnh thủy sản bằng phương pháp real-time PCR

Bên cạnh bộ kít phát hiện bệnh MrNV và XSV chúng tôi còn cung cấp một số bộ kit phát hiện các bệnh khác như bệnh đốm trắng, hội chứng gan tụy cấp tính , bệnh hoại tử cơ quan tạo máu và cơ quan lập biểu mô,..

Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện định danh loài Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn thiết kế tối ưu một phòng thí nghiệm đạt chuẩn với chất lượng và giá cả cạnh tranh nhất. Mời Qúy khách hàng tham khảo trong Danh mục sản phẩm liên quan lĩnh vực sinh học phân tử

Tại sao nên chọn Visikit

Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử hiện nay đang là mũi nhọn phát triển của chúng tôi.

Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485:2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý chất lượng cho sản phẩm đảm bảo sản phẩm đến tay bạn là luôn có chất lượng đảm bảo nhất.

Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R&D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng.

Đặc biệt chúng tôi luôn hỗ trợ các khách hàng mới thử nghiệm các sản phẩm của chúng tôi trước khi bạn quyết định mua và sử dụng các sản phẩm của chúng tôi cho doanh nghiệp của mình. Bằng cách này bạn sẽ có cách nhìn trực quan nhất, có thể so sánh với các dòng sản phẩm khác mà bạn đang sử dụng hoặc phân vân lựa chọn. Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn về kỹ thuật một cách tốt nhất, chia sẻ cùng bạn các khó khăn khi thực hiện các thao tác thí nghiệm để bạn có kết quả kiểm tra chính xác và kịp thời nhất.

Thông tin liên hệ Visitech

Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit real time PCR phát hiện đồng thời hai bệnh MrNV và XSV trên tôm do Visitech nghiên cứu và sản xuất. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích.

Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn, định danh trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới: