Đặc điểm của vi khuẩn E.coli
Vi khuẩn E.coli là trực khuẩn gram âm, thuộc nhóm vi trùng đường ruột Enterobacteriaceae, có nhiều trong tự nhiên, trong đường ruột của người và gia súc. Chúng di động bằng tiêm mao quanh tế bào, không tạo bào tử, loại có độc lực thì có capsul, loại không có độc lực không có capsul. Kích thước trung bình (0,5µ x 1-3µ) hai đầu tròn. Một số dòng có lông bám (pili).
Ecoli là các vi khuẩn thường sống trong ruột người và động vật. Mặc dù hầu hết các chủng đều vô hại, nhưng một số chủng có thể gây bệnh do tạo ra một độc tố được gọi là độc tố Shiga. Các vi khuẩn tạo ra những độc tố này được gọi là E. coli “sản sinh độc tố Shiga” hoặc gọi tắt là STEC. E. Coli O157:H7 sinh ra chất độc Shiga (gọi là E. Coli sinh ra chất độc Shiga). Chất độc này cực mạnh nó gây tổn thương niêm mạc ruột non, có thể gây bệnh trầm trọng khi người ta nhiễm phải vi khuẩn này.
Việc nhiễm E.coli vào thực phẩm có thể gây bệnh với biến chứng nặng vì vậy việc phát hiện nhanh và đặc hiệu vi khuẩn này có thể giảm thiểu thiệt hại về kinh tế và sức khỏe.
Kháng nguyên của E. coli
Kháng nguyên O: Người ta đã biết tới gần 160 yếu tố kháng nguyên O của E. coli
Kháng nguyên K: Khoảng 100 yếu tố của kháng nguyên K đã được xác định và được chia thành 3 loại: A, B và L. Trong đó A dưới dạng vỏ quan sát được bằng kính hiển vi quang học thông thường, B và L dưới dạng màng rất mỏng chỉ có thể quan sát được nhờ kính hiển vi điện tử
Kháng nguyên H: Hơn 50 yếu tố kháng nguyên H đã được xác định
Phân loại
Dựa vào cấu trúc kháng nguyên E.coli được chia thành các type huyết thanh. Với sự tổ hợp của các yếu tố kháng nguyên O, K và H sẽ có rất nhiều type huyết thanh khác nhau. Mỗi type huyết thanh được ký hiệu bằng kháng nguyên O và K, ví dụ O86B7 (Yếu tố kháng nguyên O số 86, yếu tố kháng nguyên K số 7 loại B)
Dựa vào yếu tố gây bệnh, các E. coli có khả năng gây bệnh ở người được chia thành 2 nhóm: thứ nhất là nhóm gây bệnh đường ruột (IPEC- Intestinal pathogenic) hay E. coli gây tiêu chảy (DEC- Diarrheagenic E.coli), thứ 2 là nhóm vi khuẩn gây bệnh ngoài đường ruột (ExPEC- Exxtrainintestinal pathogenic E. coli)
Các E. coli gây bệnh đường ruột (IPEC) đã được biết đến gồm:
EPEC (Enteropathogenic E. coli): E. coli gây bệnh đường ruột
ETEC (Enterotoxigenic E. coli): E. coli sinh độc tố ruột
EIEC (Enteroinvasive E. coli): E. coli xâm nhập ruột
EAEC (Enteroaggregative E.coli): E. coli ngưng tập ruột
DAEC (Diffusely adherent E. coli): E. coli bám dính phân tán
EHEC (Enterohaemorrhagic E.coli): E. coli gây xuất huyết ruột
Hai loại E.coli gây bệnh ngoài đường ruột quan trọng nhất là:
MAEC (Meningitidis- associated E.coli): E. coli gây viêm màng não
UPEC (Uropathogenic E. coli): E. coli gây nhiễm khuẩn đường tiết niệu
Các phương pháp kiểm tra nhanh vi khuẩn E.coli
Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi khuẩn E.coli như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, Petrifilm 3M… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại các kết quả có độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất lớn với các yêu cầu nghiêm ngặt về chất lượng sản phẩm.
E.coli Real time PCR ViSiKit
Để có thể giải quyết các vấn đề đặc hiệu chúng ta có thể sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của vi khuẩn E.coli trên mẫu thực phẩm, thủy sản. Sản phẩm E.coli Real time PCR ViSiKit được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện E.coli Bên cạnh các ưu điểm của phương pháp real-time PCR sử dụng bộ kit E.coli Real time PCR ViSiKit cũng đòi hỏi các phòng thử nghiệm phải trang bị các phòng thử nghiệm đạt độ an toàn và các thiết bị như máy real-time PCR, máy ly tâm, tủ âm sâu,… và đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo chuyên nghiệp. VISITECH sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất.
Điều kiện lưu trữ
-200C
Tên sản phẩm
E.coli Real time PCR ViSiKit
Mã sản phẩm
FFR-04
Nhà sản xuất
Visitech- Việt Nam
Hạn sử dụng
12 tháng kể từ ngày sản xuất
Thành phần bộ kit
| Thành phần | Quy cách |
| 50 test | |
| FFR-04 rPCR mix | 64×20µL |
| Chứng dương E.coli | 1×100 µL |
| Chứng âm | 1x1mL |
Hướng dẫn sử dụng
Quy trình tách chiết DNA
Quy trình tách thủ công: Được áp dụng cho các phòng kiểm nghiệm nhỏ và số lượng mẫu tương đối ít. Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,…hoặc để tiện lợi hơn Visitech giới thiệu các bạn tham khảo bộ Kit tách chiết bằng phương pháp cột Silica của chúng tôi: Food DNA Extraction ViSiKit (**) hoặc bộ Tissue Viral Extraction kit (**)
Quy trình tách tự động: Được áp dụng phù hợp cho các phòng kiểm nghiệm độc lập, công ty thực phẩm, doanh nghiệp sản xuất có số lượng mẫu lớn, đòi hỏi thời gian kiểm nghiệm nhanh.
Visitech hiện đang cung cấp các loại hóa chất tự động trên đa dạng nhiều loại máy khác nhau như máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) (**) của hãng Bioer, máy tách chiết tự động của hãng Thermo Kingfisher, máy tách chiết tự động của hãng TANbead… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao dành riêng cho từng máy,.. Từ đó chúng tôi sẽ chọn Kit phù hợp cho nhu cầu của từng đơn vị. Ví dụ đối với máy NPA-32 của hãng Bioer chúng tôi có Kit tách chiết: Maga Genomic DNA/RNA Extraction VISIKIT (MGEKA-32.R.B) (**)
Để biết thêm chi tiết cho các thiết bị liên quan đến tách chiết DNA/RNA tự động các bạn có thể liên hệ Visitech qua số hotline hoặc email (**)
Thực hiện phản ứng qPCR
- Đầu tiên bạn kiểm tra số lượng mẫu, lấy số lượng cần thiết ống FFR-04 rPCR mix sau đó rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15–25°C), spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.
- Bạn hãy mở nắp lần lượt và hút 5 µL mẫu cho vào các tube FFR-04 rPCR mix đã chuẩn bị ở trên theo thứ tự: Chứng âm, chứng âm tách chiết, DNA mẫu và cuối cùng là mẫu đối chứng dương nhất sau đó đóng nắp tube để hạn chế việc nhiễm chéo tốt nhất.
- Mỗi lần chạy nên có ít nhất một chứng âm tách chiết,một chứng dương và một chứng âm PCR để có thể kiểm soát kết quả test.
- Sau khi bạn thực hiện các bước trên bạn hãy kiểm tra lại nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho E.coli và kênh màu HEX cho chứng nội.
Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:
| 1 chu kỳ: | 95oC | 3 phút |
| 95oC | 10 giây | |
| 45 chu kỳ: | 95oC | 30 giây (chọn đọc tín hiệu ở bước này) |
Phân tích kết quả
- Mẫu âm tính với E.coli : chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu
- Không xuất hiện tín hiệu nào, kể cả màu HEX: Phản ứng qPCR bị ức chế, do đó không thể kết luận được là mẫu âm tính hay dương tính. Tiến hành pha loãng mẫu 10 lần hoặc tách lại DNA.
- Mẫu dương tính với E.coli: đường biểu diễn huỳnh quang FAM, HEX cùng vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.
Bảng tóm tắt phân tích kết quả:
| STT | E.coli (FAM) | IC (HEX) | Kết luận |
| 1 | – | + | Mẫu âm tính với E.coli |
| 2 | + | -/+ | Mẫu dương tính với E.coli |
| 3 | – | – | Không thể kết luận |
Xử lý sự cố
Đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của Visitech chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục:
| Sự cố | Nguyên nhân | Khắc phục |
| Không xuất hiện tín hiệu nào ở tất cả các giếng, kể cả chứng dương |
|
|
| Chứng dương bình thường mẫu xét nghiệm không cho tín hiệu
vượt ngưỡng nào, kể cả màu HEX |
|
|
| Tín hiệu FAM, HEX vượt ngưỡng trong chứng âm, chứng âm tách chiết |
|
|
Tại sao nên chọn Visikit
Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử là một trong những thế mạnh của chúng tôi.
Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485 năm 2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý an toàn cho sản phẩm.
Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R & D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng.
Đặc biệt, công ty chúng tôi có hàng DEMO để chạy thử nghiệm nhằm chứng minh chất lượng đối với những khách hàng có nhu cầu. Kỹ sư chúng tôi sẽ trực tiếp hướng dẫn và training cho tới khi thành thạo.
Visitech – Nhà sản xuất Kit PCR chất lượng cao
Ngoài việc phát hiện E.coli trong thực phẩm bằng phương pháp realtime PCR, Visitech chúng tôi còn cung cấp thêm các kit qPCR phát hiện các loài vi sinh gây bệnh thực phẩm khác theo link danh mục sau: https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/kit-test/kit-real-time-pcr/
Khi truy cập vào link này, chúng ta sẽ thấy thêm một số loại Kit realtime khác dùng để phát hiện một số tác nhân gây bệnh trong thực phẩm. Ví dụ như: Kit qPCR để phát hiện Staphylococcus aureus (**); Kit qPCR Listeria spp. (**), Kit qPCR Salmonella spp. (**)…
Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện bệnh, Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Mời Qúy khách hàng tham khảo Link bên dưới: https://visitech.vn/danh-muc-san-pham/sinh-hoc-phan-tu/
Thông tin liên hệ Visitech
Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit qPCR phát hiện E.coli của Visitech mà chúng tôi biên soạn. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích.
Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới:
- Email: info@visitech.vn
- Hotline: 0919112141
- Zalo: 0919112141
- Website: https://visitech.vn/
- Map: Công ty TNHH Khoa Học Kỹ Thuật Việt Sinh
- Kênh Youtube: Visitech
- Fanpage: Visitech
- Địa chỉ: 730/1/2/7C Hương Lộ 2, Phường Bình Trị Đông A, Quận Bình Tân, Tp.HCM
Hãy là người đầu tiên nhận xét “E.coli real time PCR Visikit FFR-04” Hủy
Sản phẩm tương tự
Đánh giá
Chưa có đánh giá nào.