Kit multiplex real time PCR phát hiện virus WSSV IHHNV trên tôm nuôi

WSSV/ IHHNV Multiplex real time PCR Visikit FARA-16

Mô tả
Đánh giá (0)

Bệnh WSSV – IHHNV trên tôm là gì?

Đây là bộ kit multiplex phát hiện hai bệnh đốm trắng và hoại tử cơ – nhóm bệnh phổ biến gây thiệt hại lớn trong nuôi trồng thủy sản. 
Vi rút gây hội chứng đốm trắng WSSV (White Spot Syndrome Virus) là một loại vi rút gây bệnh cho tôm có độc lực mạnh và khả năng phát tán mầm bệnh nhanh chóng.

Tôm nhiễm WSSV có thể nhanh chóng phát triển các đốm trắng (đường kính từ 0.5–3.0 mm) trên vỏ và bên trong biểu bì. Các dấu hiệu khác của WSSV bao gồm giảm tiêu thụ thức ăn đột ngột, cơ thể đổi màu đỏ và lớp biểu bì lỏng lẻo. Tất cả các giai đoạn phát triển của tôm đều có thể nhiễm bệnh. Vi rút WSSV có khả năng tồn tại trong nước mặn từ 5-40‰, độ pH 4-10 nhiệt độ 0 – 80⁰C.

Vi rút gây hoại tử cơ quan lập biểu mô và cơ quan tạo máu có tên IHHNV (Infectiou Hyperdermal và Hematopietic Necrosis Vi rút) hay còn gọi là vi rút Penaeus stylirostris densovirus (PstDNV) gây chết hàng loạt trên tôm xanh (Penaeus stylirostris). Vi rút này là tác nhân gây bệnh còi cọc và dị dạng (RDS) trên tôm thẻ chân trắng Penaeus vannamei.

Vi rút IHHNV thuộc Parvovirus, họ Parvoviridae, cấu trúc di truyền là phân tử DNA mạch đơn (ssDNA), bệnh IHHNV lan truyền cả chiều đứng và chiều ngang, vi rút có thể truyền từ tôm bố mẹ sang tôm ấu trùng hoặc lây nhiễm ở giai đoạn sớm của ấu trùng tôm.

Cả hai bệnh do đều do vi rút gây ra lây theo chiều ngang (tôm khỏe sang tôm bệnh thông qua môi trường hoặc qua đường tiêu hóa của mô bị nhiễm bệnh thông qua việc ăn thịt tôm bị bệnh và chết) hoặc chiều dọc (từ tôm bố mẹ truyền cho tôm giống).

Với mức độ phổ biến cao, phân bố rộng và khả năng gây thiệt hại kinh tế đáng kể trong ngành nuôi tôm, vì vậy việc nghiên cứu và phát hiện kịp thời vi rút WSSV và IHHNV là rất quan trọng. Đặc biệt trong thời điểm chưa có thuốc đặc hiệu điều trị và nuôi cấy dòng vi rút này rất khó khăn thì việc sàng lọc phát hiện sớm bệnh sẽ giảm thiểu được tối đa thiệt hại kinh tế.

Công dụng của việc phát hiện sớm tôm mắc bệnh WSSV – IHHNV

Kiểm soát tôm giống

Sàng lọc thức ăn cho tôm bố mẹ

Kiểm soát bệnh của ao nuôi

Kiểm tra các mẫu môi trường trong khu vực nuôi trồng

Hiện nay có rất nhiều phương pháp thử nghiệm sự hiện diện của vi rút gây bệnh thủy sản như: các phương pháp phân lập và thử nghiệm sinh hóa truyền thống, kit test nhanh,… Tuy nhiên hầu hết các phương pháp này đều mang lại các kết quả mang độ chính xác tương đối và thời gian thử nghiệm lâu, không phù hợp với các đơn vị sản xuất cần kết quả thí nghiệm có độ tin cậy cao. Tuy nhiên nếu để sàng lọc nhanh cho các hộ nuôi trồng nhỏ lẻ bạn có thể tham khảo các kit test nhanh. Đối với mỗi kit test chúng ta chỉ có thể phát hiện lần lượt các bệnh, không thể khẳng định chính xác là thủy sản chỉ mắc một bệnh duy nhất.

WSSV – IHHNV Real-time PCR Visikit

Vì vậy việc sử dụng phương pháp real-time PCR để kiểm tra sự hiện diện của tổ hợp nhiều loại vi rút gây bệnh trên mẫu tôm chỉ thông qua một thí nghiệm sẽ giúp cải thiện được thời gian và độ đặc hiệu rất cao. Sản phẩm WSSV – IHHNV Real-time PCR Visikit được sử dụng phổ biến trong phương pháp này mang lại giá trị thử nghiệm đạt độ nhạy và độ đặc hiệu cao trong phát hiện vi rút gây bệnh WSSV hoặc IHHNV. Bên cạnh các ưu điểm của phương pháp real-time PCR sử dụng bộ kit WSSV – IHHNV Real-time PCR Visikit cũng đòi hỏi các phòng thử nghiệm phải trang bị các phòng thử nghiệm đạt độ an toàn và các thiết bị như máy real-time PCR, máy ly tâm, tủ âm sâu,… và đội ngũ kỹ thuật viên được đào tạo chuyên nghiệp. Đặc biệt đối với phương pháp này bạn phải trang bị một máy Real-time PCR đa kênh đọc để có thể xác định nhiều mầm bệnh cùng lúc.

VISITECH sẽ giúp bạn giải quyết tất cả các vấn đề trên để mang lại hiệu quả công việc và lợi nhuận tốt nhất. Chúng tôi sẽ lựa chọn cho bạn những thiết bị tốt nhất phù hợp với yêu cầu của bạn.

Phương pháp này có thể sử dụng cho các phòng thí nghiệm nhỏ, các công ty, doanh nghiệp yêu cầu kiểm nghiệm, kiểm soát sự hiện diện của vi vi rút WSSV hay IHHNV trong nuôi trồng tôm.

Điều kiện lưu trữ

-20⁰C

Tên sản phẩm

WSSV/ IHHNV Real-time PCR Visikit

Mã sản phẩm

FARA-16

Nhà sản xuất

Visitech – Việt Nam

Hạn sử dụng

12 tháng kể từ ngày sản xuất

Thành phần bộ kit

Thành phần	Quy cách
Thành phần	50 test
WI qPCR mix bao gồm: Taq. Polymerase Probe MgCl2 dNTP Mồi (Primers) Nước	64×20µL
Chứng dương WI	1×100 µL
Chứng âm	1x1mL

Hướng dẫn sử dụng bộ kit Real time PCR xác định bệnh IHHNV, WSSV trên tôm

Quy trình tách chiết DNA/ RNA

Quy trình tách thủ công

Thường được áp dụng cho các phòng kiểm nghiệm nhỏ và số lượng mẫu tương đối ít. Các bạn có thể sử dụng các phương pháp thu hồi DNA bằng các hóa chất như Phenol, Chloroform, Isopropanol,…hoặc sử dụng các bộ tách chiết cột silica từ mẫu tôm như Highpure Viral Extraction Visikit (HEKA-01).

Quy trình tách tự động

Phù hợp cho các phòng kiểm nghiệm độc lập, công ty, doanh nghiệp sản xuất có số lượng mẫu lớn, yêu cầu thời gian kiểm nghiệm nhanh. Bộ Maga Genomic DNA/RNA Extraction VISIKIT (MGEKA-32.R.B) được khuyến cáo sử dụng cho tách chiết DNA/RNA vi rút từ mẫu tôm kết hợp với các loại máy tách chiết hạt từ như: Máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) Bioer,… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao khác.

Visitech hiện đang cung cấp các loại hóa chất tự động trên đa dạng nhiều loại máy khác nhau như máy tách chiết DNA/ RNA tự động Gene Pure Plus (NPA-32) [**] của hãng Bioer, máy tách chiết tự động của hãng Thermo Kingfisher, máy tách chiết tự động của hãng TANbead… Đối với mỗi dòng máy tách chiết tự động sẽ có những đặc điểm khác nhau như số lượng mẫu tách cho mỗi lượt, thời gian thực hiện, các vật tư tiêu hao dành riêng cho từng máy. Để biết thêm chi tiết cho các thiết bị liên quan đến tách chiết DNA/RNA tự động các bạn có thể liên hệ Visitech qua số hotline hoặc email [**]

Thực hiện phản ứng PCR

- Đầu tiên bạn kiểm tra số lượng mẫu, lấy số lượng cần thiết ống WI qPCR mix sau đó rã đông ống ở nhiệt độ phòng (15–25°C), spindown để toàn bộ chất lỏng di chuyển xuống đáy.
- Bạn hãy mở nắp lần lượt và hút 5 µL mẫu cho vào các tube WI qPCR mix đã chuẩn bị ở trên theo thứ tự: Chứng âm, chứng âm tách chiết, DNA mẫu và cuối cùng là mẫu đối chứng dương sau đó đóng nắp tube để hạn chế việc nhiễm chéo tốt nhất.
- Mỗi lần chạy nên có ít nhất một chứng âm tách chiết,một chứng dương và một chứng âm PCR để có thể kiểm soát kết quả test.
- Sau khi bạn thực hiện các bước trên bạn hãy kiểm tra lại nắp PCR và spindown để chất lỏng di chuyển xuống đáy trước khi đặt vào máy. Chọn kênh màu FAM cho WSSV, TexasRed đối với IHHNV và kênh màu HEX cho chứng nội.
Cài đặt chương trình nhiệt như bên dưới:

1 chu kỳ	95^oC	3 phút
45 chu kỳ	95^oC	10 giây
45 chu kỳ	60^oC	30 giây (chọn đọc tín hiệu ở bước này)

Phân tích kết quả

Mẫu âm tính với cả IHHNV và WSSV: đường biểu diễn huỳnh quang FAM và TexasRed đồng thời không vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu; chỉ có đường biểu diễn huỳnh quang HEX của chứng nội vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu
Mẫu dương tính với IHHNV: đường biểu diễn huỳnh quang TexasRed vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.
Mẫu dương tính với WSSV: đường biểu diễn huỳnh quang FAM vượt lên khỏi ngưỡng tín hiệu. Trong 1 số trường hợp mẫu dương tính mạnh với trình tự mục tiêu, đường biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dưới ngưỡng tín hiệu.

Bảng tóm tắt phân tích kết quả

STT	IHHNV (TexasRed)	WSSV (FAM)	IC (HEX)	Kết luận
1	–	–	+	Mẫu âm tính với cả IHHNV, WSSV
2	+	–	-/+	Dương tính IHHNV
3	–	+	-/+	Dương tính WSSV
4	+	+	-/+	Dương tính với cả IHHNV và WSSV
5	–	–	–	Không thể kết luận

Xử lý sự cố

Đối với bất kì sự cố nào khi sử dụng sản phẩm của Visitech chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn giải quyết một cách chuyên nghiệp nhất. Dưới đây là một số lỗi thường gặp và cách khắc phục:

Sự cố	Nguyên nhân	Khắc phục
Không xuất hiện tín hiệu nào ở tất cả các giếng, kể cả chứng dương	Cài đặt sai chương trình qPCR Khai báo vị trí và thông số giếng sai Thiết bị qPCR gặp sự cố Hóa chất của kit không được bảo quản theo đúng chỉ định	Kiểm tra lại chương trình chạy qPCR Kiểm tra lại thông tin các giếng Kiểm tra lại hoạt động của thiết bị qPCR Kiểm tra lại điều kiện bảo quản và hạn sử dụng của kit
Chứng dương bình thường mẫu xét nghiệm không cho tín hiệu vượt ngưỡng nào, kể cả màu HEX	Hàm lượng DNA thu được quá cao Có chất ức chế trong mẫu	Pha loãng 10 lần dịch DNA và thực hiện lại phản ứng PCR Bổ sung một lượng nhỏ chứng dương mục tiêu vào mẫu tách chiết. Nếu kết quả vẫn âm tính thì kết luận có chất ức chế trong mẫu. Tiến hành tách chiết lại hoặc xử lý như cách 1
Tín hiệu FAM, HEX vượt ngưỡng trong chứng âm, chứng âm tách chiết	Micropipet bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR Hóa chất PCR bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR Môi trường làm việc bị nhiễm DNA mục tiêu hoặc sản phẩm PCR	Vệ sinh hoặc thay micropipet mới; sử dụng filter tip Sử dụng hóa chất PCR khác Yêu cầu bộ phận kỹ thuật đến vệ sinh môi trường làm việc.

Danh mục Visikit cho xác định bệnh trong mẫu thủy sản

Bên cạnh đó Visitech còn cung cấp thêm các kit thử nghiệm định danh một số loài vi khuẩn, vi rút gây bệnh khác trong nuôi trồng thủy hải sản bạn có thể tham khảo tại Danh mục các kit test bệnh thủy sản bằng phương pháp real-time PCR

Bên cạnh bộ kít phát hiện bệnh WSSV và IHHNV chúng tôi còn cung cấp một số bộ kit phát hiện các bệnh khác như bệnh đốm trắng, hội chứng gan tụy cấp tính , bệnh hoại tử cơ quan tạo máu và cơ quan lập biểu mô,..

Đặc biệt, ngoài việc cung cấp hóa chất cho phát hiện định danh loài Visitech cũng đem đến cho Qúy khách hàng một giải pháp tổng thể và đầy đủ về các trang thiết bị, vật tư tiêu hao cho một phòng thử nghiệm PCR, realtime PCR đạt chuẩn. Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn thiết kế tối ưu một phòng thí nghiệm đạt chuẩn với chất lượng và giá cả cạnh tranh nhất. Mời Qúy khách hàng tham khảo trong Danh mục sản phẩm liên quan lĩnh vực sinh học phân tử

Tại sao nên chọn Visikit

Visitech tự hào là đơn vị tư nhân với nhiều năm kinh nghiệm trong nhiều lĩnh vực khác nhau, trong đó lĩnh vực sinh học phân tử hiện nay đang là mũi nhọn phát triển của chúng tôi.

Chúng tôi cam kết đưa đến tay khách hàng sản phẩm đạt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 13485:2016, là tiêu chuẩn ISO về hệ thống quản lý chất lượng cho sản phẩm đảm bảo sản phẩm đến tay bạn là luôn có chất lượng đảm bảo nhất.

Bên cạnh đó, Visitech có đội ngũ R&D có chuyên môn cao và giàu kinh nghiệm, luôn nghiên cứu, trau dồi để chọn lọc và đưa ra sản phẩm tốt nhất đến tay người sử dụng.

Đặc biệt chúng tôi luôn hỗ trợ các khách hàng mới thử nghiệm các sản phẩm của chúng tôi trước khi bạn quyết định mua và sử dụng các sản phẩm của chúng tôi cho doanh nghiệp của mình. Bằng cách này bạn sẽ có cách nhìn trực quan nhất, có thể so sánh với các dòng sản phẩm khác mà bạn đang sử dụng hoặc phân vân lựa chọn. Chúng tôi sẽ hỗ trợ bạn về kỹ thuật một cách tốt nhất, chia sẻ cùng bạn các khó khăn khi thực hiện các thao tác thí nghiệm để bạn có kết quả kiểm tra chính xác và kịp thời nhất.

Thông tin liên hệ Visitech

Trên đây là những thông tin chi tiết về Kit real time PCR phát hiện bệnh WSSV và IHHNV trên tôm do Visitech nghiên cứu và sản xuất. Hy vọng những chia sẻ trên sẽ mang đến cho Quý Khách hàng những thông tin bổ ích.

Visitech chúng tôi tự tin và tự hào với đội ngũ nhân viên có nhiều năm kinh nghiệm về lĩnh vực sinh học phân tử, đặc biệt là các xét nghiệm liên quan đến phát hiện virus, vi khuẩn, định danh trong thực phẩm, thủy sản, thú y…Chúng tôi luôn trên tinh thần sẵn sàng được tư vấn chi tiết, giải đáp thắc mắc và hỗ trợ mọi ý kiến của Qúy khách hàng. Hãy liên hệ ngay với chúng tôi theo địa chỉ bên dưới: